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背景：恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病，而在所有的恶性肿瘤中，原发性肝癌(Hepatpocellular carcinoma, HCC)所占比例超过5%，位于恶性肿瘤总致死原因的第五位。和其他恶性肿瘤一样，肝癌的复发转移是其治疗失败的主要原因。在肿瘤的转移过程中，EMT(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)所表现出的细胞学机制即细胞粘附性的丧失和迁移能力的获得作为肿瘤转移级联反应的关键环节已越来越受到学者们的关注。其最主要特征为上皮细胞标记蛋白E-cadherin表达降低，而间质标记蛋白表达上调。近来，已有相当多的证据表明，EMT是肝癌转移的关键事件，其在肝癌的侵袭转移过程中发挥着极其重要的作用。因此，如何动态监测肝癌细胞的EMT事件，对进一步剖析其机理，进而开发针对性治疗策略变得至关重要。荧光蛋白报告基因由于其异源细胞中表达稳定，不需要其他辅助因子参加，易于检测，无细胞毒性，且可利用不同荧光蛋白组合对细胞进行多重标记等优势，已成为构建指示报告系统的首选对象。而慢病毒载体作为目前被认为的最有效的理想基因转移载体之一，对分裂细胞和非分裂细胞均具有很好的感染能力，免疫反应小且无毒性，可以将外源基因有效地整合到宿主基因组上，从而达到稳定持久表达等特点，已广泛应用于基因治疗、科学研究等领域。因而构建基于慢病毒表达系统的EMT荧光指示模型具有很好的基础及临床意义。目标：构建基于慢病毒表达系统的、EMT相关标志物E-cadherin、Slug启动子驱动的荧光报告系统，为下一步标记示踪肝癌EMT细胞，动态显示肝癌细胞的EMT过程，建立体外肝癌细胞EMT诱导模型打下基础。方法：从Hela细胞基因组中扩增出E-cadherin及Slug启动子，并分别与红、黄、蓝三种荧光蛋白相连，然后克隆入慢病毒载体质粒中，获得E-cadherin及Slug启动子分别携带三种荧光蛋白的慢病毒载体：Lv-pE-cad-RFP/YFP/BFP和Lv-pSlug-RFP/YFP/BFP。采用磷酸钙法将慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞，生产包装得到病毒。进而以收获的Lv-pE-cad-YFP病毒感染人肝癌细胞PLC/PRF/5，并经流式分选得到YFP表达阳性和阴性的细胞，通过qRT-PCR，western blotting等技术检测病毒的有效性。结果：经酶切、测序等方法证实E-cadherin及Slug启动子驱动的多荧光报告基因载体构建成功。采用磷酸钙转染法成功包装出病毒。病毒Lv-pE-cad-YFP可高效感染人肝癌细胞PLC/PRF/5，感染后靶细胞中E-cadherin稳定表达，功能实验初步验证了该病毒有效可用。结论：成功构建了E-cadherin及Slug启动子驱动的多荧光报告系统，并验证了病毒Lv-pE-cad-YFP的有效性。为进一步研究肝癌与EMT之间的关系奠定良好基础。