研究目的： 一、应用芯片技术，筛选在正常宫颈和宫颈癌之间，IIPV阳性和HPV阴性宫颈癌之间差异表达的miRNA； 二、预测差异表达的miRNA的靶分子，探讨宫颈癌发生的机制。 材料和方法： 一、选取13例宫颈癌及其配对的正常宫颈组织样本，手工显微切割获得目标细胞，PCR检测HPV感染情况； 二、Trizol法分离总RNA，PEG法分离组织混合样品及HPV阳性的Ca Ski细胞和HPV阴性的C-33A细胞的低分子量RNA，经 Cy3荧光标记后与含有576条人类miRNA探针的芯片杂交； 三、用SAM软件，以FC大于2.5筛选在正常宫颈和宫颈癌之间， HPV阳性和HPV阴性宫颈癌组织之间，Ca，Ski和C-33A细胞之间差异表达的miRNA； 四、实时荧光定量PCR验证miR-496，miR-34b，miR-34c的差异表达； 五、TargetScan软件预测差异表达的miRNA的靶基因，寻找和宫颈癌发生相关的分子。 实验结果： 一、从宫颈癌和正常宫颈组织中纯化得到肿瘤细胞和正常鳞状上皮细胞。13例宫颈癌中HPV阳性11例，阴性2例，13例正常宫颈HPV均为阴性。 二、 RNA经定量和电泳检测，质量满足芯片杂交需求。宫颈癌细胞系，宫颈癌和正常宫颈组织miRNA芯片杂交模型建立成功。 三、发现38个在正常宫颈和宫颈癌之间差异表达明显的miRNA。33个miRNA在宫颈癌中表达明显降低，其中8个miRNA可以预测到靶基因，包括65个肿瘤基因；5个miRNA在宫颈癌中表达明显升高，但没预测到靶基因。 四、发现6个在HPV阳性和HPV阴性宫颈癌组织之间差异表达明显的miRNA，在HPV阳性的宫颈癌中，有5个表达明显升高，靶基因中39个是肿瘤基因；1个表达明显降低且没有预测到靶基因。 五、发现16个在Ca Ski和C-33A细胞之间差异表达明显的miRNA，在Ca Ski组中表达都明显升高。靶基因中101个是肿瘤基因。 miRNA-34b，34c，200b在组织和细胞系中的差异表达一致。 六、实时荧光定量PCR证实miR-496在宫颈癌中的表达明显低于正常宫颈；miRNA-34b，34c在HPV阴性宫颈癌中的表达明显低于HPV阳性宫颈癌；与芯片检测结果一致。 结论： 1．手工显微切割是从宫颈组织标本中纯化目标细胞的有效手段。 2．微阵列芯片是一种有效的高通量分析宫颈癌miRNA差异表达的研究手段。 3．使用含有576个人类miRNA探针的芯片，筛选出38个在正常宫颈和宫颈癌之间差异表达明显的miRNA。6个在HPV阳性和HPV阴性宫颈癌组织之间差异表达明显的miRNA。16个在Ca Ski和C-33A细胞之间差异表达明显的miRNA。 4．实时荧光定量。PCR证实miR-496在宫颈癌中的表达明显低于正常宫颈；miRNA-34b，34c在HPV阴性宫颈癌中的表达明显低于HPV阳性宫颈癌。实时荧光定量PCR是检测单个miRNA表达水平的有效手段。 5．差异表达的miRNA的预测靶分子中包括多个肿瘤基因，有助于认识宫颈癌发生的分子机制。