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人纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)即凝血因子Ⅰ,是血浆中含量最高的凝血因子,在凝血级联反应的最后一步,激活后的凝血酶使Fg转变为纤维蛋白,发挥止血功能。Fg是用于外科止血非常有效的生物胶的主要成分。本研究以正常人血浆低温乙醇法分离的Cohn FⅠ和Cohn FⅠ+Ⅲ(组分Ⅰ及组分Ⅰ+Ⅲ沉淀)为原材料,通过甘氨酸沉淀后,分别用离子交换与疏水层析两种方法提取Fg。首先对原材料(FⅠP及FⅠ+ⅢP)的溶解条件、Fg的保存缓冲液进行了摸索和优化,溶解时原材料(FⅠP及FⅠ+ⅢP)与缓冲液A的比例为3～4g:30ml,溶解时间为90min;Fg的保存缓冲液为pH范围6.8～7.2、NaCl浓度范围0.6～0.8mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,实验结果表明保存缓冲液在24h内维持Fg活性效果明显。同时对层析前样品的活性稳定时间进行了检测,结果表明为维持Fg的活性,层析前样品处理完成后应立即上层析柱。其次对FⅠP及FⅠ+ⅢP经甘氨酸沉淀得到的Fg粗制品分别进行了离子交换和疏水层析纯化条件的优化,离子交换剂先后使用过两种,Q Sepharose HP(GE),Q Sepharose XL(GE),纯化结果不理想,需要在填料的选择上进一步的摸索;以FⅠP为原材料,疏水层析Butyl Sepharose 4FF(GE)制备的Fg,经凝固活力和Jacobsson改良的可凝固蛋白法测定,平均凝固时间为46s,纯度为85.6%,层析回收率为78.5%,以FⅠ+ⅢP为原材料制备的Fg,平均凝固时间为177s,纯度为67%,层析回收率为60.6%。对经凝血酶处理后的样品上清检测发现,存在无凝固活力的Fg。最后对制备的Fg检测纤溶酶原,结果表明,经疏水层析纯化后可以将纤溶酶原除去。通过SDS-PAGE分析Fg非还原的分子量为300～340kDa,还原后三个亚基的分子量分别为68kDa,54kDa,48kDa。,经Western-bloting鉴定表明,纯化得到的产物即为Fg成分。