2目的:课题组前期从传统中药入手,通过预实验发现中药辛夷提取物辛夷脂素对肺动脉血管具有明显的舒张作用,具有潜在的肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)治疗作用。本研究旨在此基础上研发一种具有缓释作用的肺靶向PH治疗候选药物。(1)建立血液等生物样本中辛夷脂素的含量测定方法,了解灌胃和注射给药后药物的吸收、分布、代谢等规律,初步对辛夷脂素在动物体内的药代动力学特性和组织分布进行评价;(2)通过优化制备工艺,建立质量评价标准,制备具有缓释作用的肺靶向辛夷脂素微球制剂;(3)对载药微球在动物体内的药代动力学和组织分布进行分析,对靶向性、缓释效果和机体毒性等方面做出评价。方法:本研究采用高效液相色谱分析方法,建立了辛夷脂素生物样本检测方法,使用DAS2.0药代动力学软件,对灌胃和尾静脉注射两种给药途径后,辛夷脂素在SD大鼠体内药代动力学特性分别进行了分析,拟合绘制出两种不同给药途径的血药浓度-时间曲线图;采用乳化-溶剂挥发法制备辛夷脂素微球,通过单因素实验和正交实验对制剂工艺进行优化,确定最佳制备方法,利用高效液相色谱技术对微球的包封率和载药量进行检测,使用扫描电镜、Zata电位分析仪等对微球的特征性能进行评3价,利用高效液相色谱仪分析技术、活体成像技术以及激光共聚焦扫描显微镜对制剂的组织靶向性和缓释效果进行评价,明确该制剂在动物体内的药代动力学和组织分布情况。结果:实验采用高效液相色谱分析方法,选用甲醇作为血液和组织中药物提取的沉淀剂,以甲醇-水(58:42)作为流动相,流速1 m L/min,柱温25°C,进样量20μL为分析条件,建立了一种专属性良好、准确度高且线性范围合理的辛夷脂素生物样本检测方法。实验采用SD大鼠灌胃给药(50 mg/kg)和尾静脉注射给药(20 mg/kg)两种给药方式,给药后药物均能被迅速吸收。灌胃后约1 h血药浓度达到第一次高峰,尔后逐渐下降,在290±24.49 min达到最大血药浓度,峰浓度Cmax为464.38±152.11ng/m L,药物半衰期为106.39±84.93 min;注射给药后峰浓度在20±1.28 min出现,峰浓度为2049.0±723.43 ng/m L,半衰期为80.75±36.19 min,8 h内均代谢至最低检测限以下。组织分布研究发现,通过上述两种途径给药后,在30 min、2 h、6 h和8 h等4个取样时间点中,除口服给药后30 min肾组织未能检测到药物外,其余时间在心、肝、肺和肾组织均可以检测到辛夷脂素,但肺组织各时间点的浓度均较其余组织低。实验进一步采用乳化-溶剂挥发法制备了辛夷脂素微球,优化确定的最佳制备工艺为:PLGA与药物比例为6:1,PVA浓度为2%,乳化时间为40 s,乳化剂与油相体积比为10:2,制备所得微球呈蜂窝圆球状,约64.2%的微球粒径分布在10.17±3.08μm左右,Zeta电位为-4.49 m V,平均密度为0.31±0.02 g/cm3,包封率和载药量分别为76.47%和15.65%。在PBS缓冲盐溶液(p H=6.8)中15天的释放度为7.62%,但在缓冲盐溶液中加入20%的甲醇溶液后,其72 h的释放度可达到80%。载药微球组织分布实验发现,经鼻吸入或尾静脉注射给药1 h后,药物能迅速富集于肺组织。经鼻吸入30 min后肺组织平均浓度为1050.118±56.57 ng/m L,8 h后达到峰浓度24869.14±36.87 ng/m L,24 h浓度仍在2009.88±96.53 ng/m L,维持在较高浓度水平;尾静脉注射30 min后肺组织平均浓度为3364.51±49.51 ng/m L,8 h达到峰浓度23991.06±77.95 ng/m L,24 h浓度高达10660.74±86.57 ng/m L,48 h仍维持在1062.59±33.47 ng/m L。活体成像显示,两种方式给药后载药微球都可达肺部组织,实现了靶向给药目的,进一步通过激光共聚焦扫描显微镜对组织切片观察发现,该制剂具有明显的肺靶向性和缓慢降解释放特性。两种给药方法所取肺组织切片HE染色,与正常肺组织对比,组织未见明显炎性病变,未发现有显著组织异样变化。结论:本研究建立了一种简便、易用、可靠的辛夷脂素生物样本检测方法,较系统地研究了辛夷脂素口服和静脉注射后的药代动力学和组织分布情况,进而将其制备成具有缓释效果的肺靶向微球制剂,并进行了质量评价;通过经鼻吸入和静脉注射给药方式对该制剂的药代动力学和靶向性进行了研究,间接证明了通过以上两种给药方式,作用时间延长,可作为治疗PH的候选药物进一步研究。