论文部分内容阅读
目的研究血脂康对AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块形成的影响及其作用机制。方法8周龄AopE-/-小鼠,部分结扎左颈动脉和左肾动脉制备颈动脉易损斑块模型,随机分为对照组(n=16)、阿托伐他汀组(n=16)、低剂量血脂康组(n=19)、高剂量血脂康组(n=21),分别连续灌胃生理盐水300ul/kg/d、阿托伐他汀10mg/kg/d、血脂康600mg/kg/d和1200mg/kg/d 8周。HE染色评估血管组织病理改变,油红O染色标记脂质,天狼猩红-苦味酸染色标记胶原,DHE探针检测ROS水平,免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测斑块内巨噬细胞(CD68)、血管平滑肌细胞(α-actin)含量,以及MMP-8、MMP-13、P-IRE1、P-PERK、P-eIF2α、CHOP和cleaved caspase-3蛋白表达,TUNEL染色观察斑块内细胞凋亡水平。同时,体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,7-酮胆固醇(7-KC)诱导内质网应激(ER stress),Western blot检测XBP-1s、P-PERK、CHOP、cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达变化,D API染色观察细胞核的形态变化,荧光探针DCF-DA结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测细胞内ROS水平。结果1)与对照组相比,阿托伐他汀组、低剂量及高剂量血脂康组AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块比例、斑块破裂伴腔内血栓比例均明显减少(P<0.05),阿托伐他汀组和低剂量血脂康组斑块面积较对照组无明显变化(P>0.05),但高剂量血脂康组的斑块面积显著减少(P<0.05)伴斑块内巨噬细胞浸润和脂质沉积减低(P<0.05),血管平滑肌细胞和胶原比例增加(P<0.05),基质金属蛋白酶(MMPs)表达下降(P<0.05);2)与对照组相比,高剂量血脂康组斑块内坏死核心的绝对面积及占斑块面积的比例、凋亡细胞的数量均显著减少(P<0.05),离体实验显示血脂康能明显抑制7-KC诱导的RAW264.7细胞凋亡数量及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3,cleaved PARP)表达;3)高剂量血脂康组斑块内ROS及P-IRE1、P-PERK、P-eIF2α、CHOP等ER stress激活相关蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),离体实验显示血脂康能明显降低7-KC诱导的RAW264.7细胞ROS、XBP-1s、P-PERK和CHOP上调。结论血脂康能够显著改善AopE-/-小鼠颈动脉斑块稳定性,高剂量血脂康能够抑制易损斑块的形成,其机制主要与降低斑块内氧化应激水平,抑制ER stress激活和减少细胞凋亡有关。