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二烯丙基二硫化物(Diallyl Disulfide,DADS)是大蒜(Garlic)中的主要有效成分,对多种癌症细胞均有抑制作用,以诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡为主要调控机制。鸡马立克氏病(Marek’s disease,MD)由鸡马立克氏病毒(Marek’s disease virus,MDV)感染所致,是一种具有高度传染性的淋巴组织增生性肿瘤疾病,造成了禽类养殖业的巨大经济损失。同时,由于病毒毒力的增强和疫苗存放过久等多种因素,导致部分疫苗已不能为宿主提供保护作用,而天然植物提取物中活性成分抗肿瘤作用机制的研究成为了热点。MDCC-MSB-1细胞作为鸡马立克病肿瘤淋巴母细胞的细胞系,常用于研究抗肿瘤作用机制的模型。本研究通过二烯丙基二硫化物诱导MDCC-MSB-1细胞发生细胞周期阻滞和细胞凋亡,进一步探究在细胞凋亡中线粒体凋亡通路内主要的信号因子,为开发新型药物减少马立克氏病肿瘤造成的经济损失提供了理论基础。本试验采用CCK-8法确证DADS对MDCC-MSB-1细胞活力的影响,并运用吖啶橙(Acridine Orange,AO)荧光染色法对细胞凋亡的形态进行初步观察;通过流式细胞术检测细胞周期阻滞以及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;在验证线粒体凋亡通路时,采用JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bax蛋白表达,活性检测试剂盒测定caspase-9和caspase-3蛋白活性,利用Q-PCR对caspase-9和caspase-3 mRNA的相对表达量进行定量分析。试验结果表明:与空白组相比,50、100和150μmol/L的DADS作用MDCC-MSB-1细胞24h后可以有效地降低细胞的活力百分比,呈剂量依赖性,同时,荧光染色观察发现随着药物浓度的升高,细胞胞质从均染向碎片的状态转变,并在150μmol/L时边聚程度明显可见。二烯丙基二硫化物诱导MDCC-MSB-1细胞停滞的G2/M期的数量增多,线粒体膜电位下降,Bax蛋白表达上调,caspase-9、caspase-3活性的上升以及mRNA的过表达。二烯丙基二硫化物将MDCC-MSB-1细胞阻滞在G2/M期,并通过诱导促凋亡蛋白Bax蛋白表达量增多,致使线粒体膜电位的下降继而增大线粒体膜的通透性,释放促凋亡因子,募集并激活其下游蛋白caspase-9,最终激活caspase-3,诱导细胞内线粒体通路的活化。Caspase-9和caspase-3 mRNA的过表达显示着DADS可以在转录水平上对MDCC-MSB-1细胞的凋亡蛋白进行调控。