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DNA疫苗既可以诱导细胞免疫反应又可以诱导体液免疫反应还能够诱导长期的免疫记忆，被誉为第三代疫苗。大规模制备临床级质粒DNA的工艺逐渐受到关注。 本课题组前期研究中已经构建完成了针对中国主要流行毒株HIV-1 CN54的DNA疫苗载体pDRVI2.0K及无抗性疫苗pDRVI2.0-gpnef。 本论文针对DH5α／pDRVI2.0K进了生产工艺摸索及优化，首先在摇瓶条件下，应用正交实验对M9培养基中添加的CN源及无机盐配方等进行了优化。并且对葡萄糖的转化率进行了计算，为发酵培养基奠定了基础。在5L发酵罐中对携带抗生素选择标记的质粒的高密发酵工艺进行了小试研究，在发酵过程中需要维持生产菌的生长生产的适当发酵条件。对培养条件如培养温度、PH、接种量、流加时间和流加方式等进行了探讨。在最适条件下，DH5α／pDRVI2.0K菌体OD600达到39，而质粒的浓度达到90mg／L。 并且对DH5α／pDRVI2.0-gpnef进行了间歇发酵和分批流加培养，对两者进行对比。结果表明，分批流加菌体量虽然有所增加，但质粒浓度并未明显提高。 还建立了一套较齐全的DNA疫苗质量控制方法，包括：内毒素、蛋白质、gDNA、RNA及异构质粒DNA检测等。检测表明，利用碱裂解法结合简单的离子交换层析、凝胶过滤层析和选择性沉淀方法，本论文所制备的质粒DNA的质量达到了临床应用标准。 在GMP条件下利用75L自控发酵罐和AKTA Explorer层析系统对HIV DNA疫苗DH5α／pGPNEF和DH5α／pGP140TM进行了中试生产工艺探索。