论文部分内容阅读
卵巢癌(Ovarian Cancer)是起源于输卵管及卵巢等部位的恶性肿瘤,死亡率高于其他妇科肿瘤,卵巢癌具有异质性,但早期卵巢癌隐匿于腹腔中,缺乏卵巢癌特异性标记物,现有的影像学手段无法分辨早期的肿瘤及囊肿,及判断肿瘤的分型,致使复发率高和耐药性强。
作为一种新型分子工具,核酸适体有特异性强、结合亲和力强等特点,在生物医学及材料等方向具有良好的发展潜力。目前蛋白质筛选(Protein-SELEX )和细胞筛选(Cell-SELEX)的技术已趋于成熟,但核酸适体相关的临床应用研究仍在探索中。组织筛选(Tissue-SELEX)是针对临床癌组织及临床癌旁组织进行筛选,得到特异性识别临床癌组织样本的适体,在临床检验领域有重要作用。本文中,有以下研究:
(1)临床早期卵巢癌组织核酸适体筛选
基于已发表的各项SELEX技术,我们对Tissue-SELEX技术进行优化,选用X-Aptamer文库,优化为2轮筛选,设置6组样本:正筛文库样本、正筛文库与临床卵巢癌组织孵育样本、正筛文库与临床卵巢癌癌旁组织孵育样本、负筛文库样本、负筛文库与临床卵巢癌组织孵育样本、负筛文库与临床卵巢癌癌旁组织孵育样本,并将产物进行PCR扩增及二代测序,挑选出8条候选序列。通过流式细胞术和激光共聚焦,验证得到2条核酸适体LNY-7和LNY-8,可识别卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞,对卵巢上皮IOSE-80细胞无识别能力。
(2)临床早期卵巢癌组织核酸适体LNY-7和LNY-8的性质考察
通过对已筛选得到的核酸适体LNY-7和LNY-8分别进行性质和功能鉴定。通过对比检测2条核酸适体LNY-7和LNY-8对卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞的解离平衡常数、稳定性、靶标检测、内化检测和组织玻片等实验,发现LNY-7的亲和力较好,而LNY-8的稳定性较好,且二者的靶标均为细胞表面膜蛋白,均可内化进入HO-8910细胞定位于高尔基体中。
以上结果表明核酸适体LNY-7和LNY-8均可靶向识别卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞,因此核酸适体LNY-7和LNY-8的发现拓宽了卵巢癌的临床诊断及治疗的应用前景。
作为一种新型分子工具,核酸适体有特异性强、结合亲和力强等特点,在生物医学及材料等方向具有良好的发展潜力。目前蛋白质筛选(Protein-SELEX )和细胞筛选(Cell-SELEX)的技术已趋于成熟,但核酸适体相关的临床应用研究仍在探索中。组织筛选(Tissue-SELEX)是针对临床癌组织及临床癌旁组织进行筛选,得到特异性识别临床癌组织样本的适体,在临床检验领域有重要作用。本文中,有以下研究:
(1)临床早期卵巢癌组织核酸适体筛选
基于已发表的各项SELEX技术,我们对Tissue-SELEX技术进行优化,选用X-Aptamer文库,优化为2轮筛选,设置6组样本:正筛文库样本、正筛文库与临床卵巢癌组织孵育样本、正筛文库与临床卵巢癌癌旁组织孵育样本、负筛文库样本、负筛文库与临床卵巢癌组织孵育样本、负筛文库与临床卵巢癌癌旁组织孵育样本,并将产物进行PCR扩增及二代测序,挑选出8条候选序列。通过流式细胞术和激光共聚焦,验证得到2条核酸适体LNY-7和LNY-8,可识别卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞,对卵巢上皮IOSE-80细胞无识别能力。
(2)临床早期卵巢癌组织核酸适体LNY-7和LNY-8的性质考察
通过对已筛选得到的核酸适体LNY-7和LNY-8分别进行性质和功能鉴定。通过对比检测2条核酸适体LNY-7和LNY-8对卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞的解离平衡常数、稳定性、靶标检测、内化检测和组织玻片等实验,发现LNY-7的亲和力较好,而LNY-8的稳定性较好,且二者的靶标均为细胞表面膜蛋白,均可内化进入HO-8910细胞定位于高尔基体中。
以上结果表明核酸适体LNY-7和LNY-8均可靶向识别卵巢癌A2780细胞和HO-8910细胞,因此核酸适体LNY-7和LNY-8的发现拓宽了卵巢癌的临床诊断及治疗的应用前景。