论文部分内容阅读
目的：建立耐氨甲蝶呤（MTX）对映体的人白血病BALL-1和CCRF-CEM细胞株，观察其生物学特性。分析MTX不同对映体耐药细胞株表皮生长因子受体（EGFR）信号通路相关基因的表达。 方法：浓度递增结合低剂量持续诱导的方法建立 MTX不同对映体耐药细胞株，显微镜观察不同MTX对映体作用BALL-1和CCRF-CEM细胞株后细胞形态变化及活性差异，MTT法检测耐药细胞株和亲本细胞株耐药指数，细胞计数法绘制细胞生长曲线，Transwell实验检测D-(-)-MTX耐药细胞株与L-(+)-MTX耐药细胞株迁移能力差异，流式细胞仪检测细胞周期。RT-PCR法检测各细胞株EGFR、KRas、TGF、PI3K基因mRNA的表达情况。 结果：1.采用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法，成功建立MTX不同对映体对BALL-1、CCRF-CEM细胞的耐药细胞株；MTT检测结果表明：L-(+)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM对L-(+)-MTX的耐药指数分别为2.89，3.73。D-(-)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM对D-(-)-MTX的耐药指数分别为9.65，10.72。2.荧光显微镜观察发现L-(+)-MTX作用后的BALL-1和CCRF-CEM凋亡数和非凋亡死亡数明显高于D-(-)-MTX，而活细胞数低于D-(-)-MTX。3. Transwell迁移实验结果提示D-(-)-MTX耐药细胞株迁移能力强于L-(+)-MTX耐药细胞株。4.细胞生长曲线和流式细胞仪检测显示：与亲本细胞BALL-1，CCRF-CEM相比L型和D型耐MTX细胞株的增殖速度减慢（P<0.05），S期细胞数量减少(P<0.05)，G0/G1期细胞增多(P<0.05)。5. BALL-1细胞组(BALL-1，L型，D型耐MTX细胞株)有EGFR mRNA基因表达，目的基因与内参基因的光密度比值差异有统计学意义（F=641.41，P=0.000），L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义（P=0.000）；BALL-1细胞组有KRas mRNA基因表达（F=673.086， P=0.000），L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义（P=0.004）。CCRF-CEM细胞组（CCRF-CEM，L型，D型耐MTX细胞株）亦有EGFR和K-Ras mRNA基因表达（F=151.323，P=0.000），（F=330.894，P=0.000），其中L型与D型耐MTX细胞株光密度值差异有统计学意义（EGFRmRNA P=0.000， K-RasmRNA P=0.003）。两组细胞有TGFmRNA表达，差异无统计学意义（P>0.05）。两组细胞无PI3KmRNA基因表达。 结论：D型耐MTX细胞株增殖能力大于L型耐MTX细胞株；D型耐MTX细胞株迁移能力大于L型耐MTX细胞株；EGFR及K-Ras mRNA基因表达在L型和D型耐MTX细胞株之间存在差异。