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七氟烷对宫颈癌细胞生物学行为的影响及机制研究 第一部分 七氟烷对宫颈癌细胞生物学行为的影响 目的：探讨七氟烷对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。 方法：不同浓度（1%、2%和3%）的七氟烷分别作用宫颈鳞癌细胞（Caski细胞）和宫颈腺癌细胞（HeLa）2h和4h,分别继续培养0h、6h、18h和24h后，采用CCK-8法检测细胞增殖；采用免疫荧光染色法检测七氟烷处理前后细胞中Ki-67蛋白的表达变化；采用流式细胞仪检测细胞凋亡；七氟烷作用后继续培养0h、2h、4h和6h后，采用transwell小室法检测细胞的迁移与侵袭。 结果：（1）七氟烷对宫颈鳞癌细胞Caski的增殖无影响；（2）七氟烷明显促进宫颈腺癌HeLa细胞的增殖，呈浓度和暴露后效应时间依赖性，其中促进作用最明显的浓度和效应时间分别是3%和24h（P＜0.05）；（3）七氟烷能增加HeLa细胞中的Ki-67蛋白表达（P＜0.05），而对Caski细胞中的Ki-67蛋白表达无影响（P＞0.05）；（4）七氟烷对宫颈癌细胞的凋亡无影响（P＞0.05）；（5）七氟烷作用2h或4h，均能促进HeLa和Caski细胞的迁移和侵袭，且呈浓度和暴露后效应时间依赖性，其中作用最明显的浓度和效应时间分别是3%和6h（P＜0.05）。 结论：七氟烷能促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移，但对细胞凋亡无影响。 第二部分 七氟烷影响宫颈癌细胞迁移和侵袭作用的相关蛋白研究 目的：七氟烷影响宫颈癌细胞迁移和侵袭的相关机制。 方法：（1）2%七氟烷作用两种宫颈癌细胞2h后，继续培养4h，采用免疫荧光染色法检测细胞中侵袭和迁移相关蛋白HDAC6、MMP9、E-cadherin、β-catenin的表达变化；采用蛋白免疫印迹法检测七氟烷作用2h后不同效应时间（0、4h、6h、18h和24h）细胞中HDAC6蛋白表达的变化；（3）利用HDAC6 siRNA转染宫颈癌细胞HeLa和Caski后，应用蛋白免疫印迹技术检测RNA干扰后宫颈癌细胞内HDAC6蛋白的表达水平；（4）用2%七氟烷作用HDAC6蛋白表达抑制的宫颈癌细胞2h后，采用transwell小室法检测HDAC6蛋白对七氟烷调控宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响。 结果：（1）经免疫荧光染色发现七氟烷能促进HeLa和Caski细胞中的HDAC6和β-catenin蛋白表达，但对MMP9和E-cadherin蛋白表达无作用；（2）经蛋白免疫印迹检测后，发现七氟烷作用后HeLa和Caski细胞中的HDAC6蛋白表达随暴露后效应时间增加，以4h最明显；（3）转染HDAC6 siRNA后，观察到两种宫颈癌细胞中的HDAC6蛋白表达明显抑制，表明转染成功；（5）Transwell法结果表明，七氟烷作用后，HDAC6表达抑制的宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力较转染空载体的宫颈癌细胞减弱。 结论：七氟烷促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用可能与HDAC6和β-catenin蛋白有关。 第三部分 七氟烷通过HDAC6促进宫颈癌细胞侵袭和迁移的相关信号通路 目的：探讨七氟烷通过HDAC6促进宫颈癌细胞侵袭和迁移的相关信号通路。 方法：（1）2%七氟烷作用HeLa和Caski细胞2h后，通过免疫染色法检测乙酰化-α-Tubulin（Ac-Tublin）的表达变化；采用蛋白免疫印迹法检测七氟烷作用2h后不同时间HeLa和Caski细胞中Ac-Tublin、α-Tubulin、p-ERK1/2、ERK1/2、p-AKT和AKT蛋白的表达变化；(2)利用RNA干扰技术下调宫颈癌细胞中HDAC6的表达，采用蛋白免疫印迹法检测七氟烷作用前后宫颈癌细胞中Ac-Tublin和α-Tubulin的表达变化；采用免疫荧光染色法检测七氟烷作用前后细胞中β-catenin的表达变化；（3）应用ERK抑制剂和AKT通路抑制剂后，再用2%七氟烷处理2h,采用蛋白免疫印迹法检测抑制剂使用前后宫颈癌细胞中p-ERK1/2、ERK1/2、p-AKT、AKT和HDAC6蛋白的变化。 结果：（1）七氟烷作用后，总α-Tubulin蛋白的表达无明显变化，而Ac-Tublin的表达减少,在暴露后24h作用最明显（P＜0.05）；（2）七氟烷作用后，HDAC6的表达增加，当使HDAC6低表达后，再予七氟烷处理，结果发现HDAC6低表达组的宫颈癌细胞Ac-Tublin的表达较空载体组宫颈癌细胞增加（P＜0.05）；而β-catenin的表达在两组细胞中无明显差异；（3）总AKT和ERK1/2的表达无明显变化，而p-AKT和p-ERK1/2的表达增加（P＜0.05）；（4）ERK抑制剂和七氟烷处理组的细胞中p-ERK1/2和HDAC6的表达较单用七氟烷组减少（P＜0.05）；（5）AKT抑制剂和七氟烷处理组的细胞中p-AKT和HDAC6的表达较单用七氟烷组减少（P＜0.05）。 结论：七氟烷促宫颈癌侵袭和迁移的作用可能与其激活AKT和ERK1/2通路，增加HDAC6表达，促进Tubulin的去乙酰化有关。同时七氟烷的促侵袭和迁移作用也可能与上调β-catenin蛋白有关，但是此上调作用与HDAC6无关。