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阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性溶血性疾病，以反复发作的血管内溶血、慢性贫血及血栓形成为主要临床特征。近年证实本病为造血干细胞PIG-A基因突变所致克隆性疾病，异常克隆缺乏GPI-AP如：CD55、CD59等，导致红细胞对补体敏感性异常增高。PNH一个显著的特点是患者体内异常克隆与正常造血细胞长期共存并往往占据造血优势，其机制尚不清楚。另一方面，PNH至今仍无有效的根治方法，我们设想利用ABMT和APBSCT技术，在体外将患者自体移植物中的异常克隆去除，对正常造血干／祖细胞进行体外扩增，同时应用化疗和／或免疫抑制剂尽量减少体内残留的PNH克隆后，再回输给患者以重建造血，从而根治PNH。要实现这一目标，本文首先研究了将PNH患者骨髓中CD34~+CD59~+细胞与CD34~+CD59~-细胞有效分开的方法，对CD34~+CD59~+细胞的体外扩增性能进行探索，然后将PNH患者CD34~+CD59~+细胞及CD34~+CD59~-细胞与正常人CD34~+细胞的扩增过程进行比较研究，以期为探索PNH新的治疗途径提供重要的实验依据。 本研究首先利用免疫磁珠富集纯化CD34~+细胞，然后再应用流式细胞仪的细胞分选功能(即：磁珠-流式细胞仪二步分选法)，能有效地从PNH患者骨髓单个核细胞中分选出CD34~+CD59~+及CD34~+CD59~-两群细胞，其纯度均在95％以上。然后对CD34~+CD59~+细胞进行体外扩增培养，结果显示：(1)FL、TPO对CD34~+CD59~+细胞有扩增作用，进行体外扩增的基本细胞因子组合为：SCF+IL-3+IL-6+FL+TPO。(2)体外扩增的最适宜的细胞因子组合为SCF+IL-3+IL-6+FL+TPO+EPO，最适宜的扩增时机为第7天，在此条件下，CD34~+CD59~+细胞的扩增倍数为22.42±3.73倍。(3)CD34~+CD59~+细胞在扩增以后，仍为CD59~+细胞，仍保持较好的形成集落形成单位(CFU)的能力，但是其向多系分化的潜能有所下降。(4)无血清培养基较含胎牛血清培养基有扩增优势。 流式细胞仪分选虽然经常用于细胞纯化，但难于满足大规模临床细胞分选的需要，因此，本研究利用免疫磁珠系统，经过两次分选，应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34~+细胞吸附的磁珠，从而从PNH患者骨髓中分离出