【摘 要】
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目的:通过体外细胞实验,观察青蒿琥酯（ART）与替莫唑胺（TMZ）联合作用对U251细胞（U251-MG）的增殖、迁移及凋亡的影响,蛋白质印迹法（Western Blotting）检测Bcl-2的表达进一步探讨其可能的作用机制。方法:通过体外细胞实验,MTT分析U251-MG的增殖能力,从而确定后续实验所需ART及TMZ的合适浓度和时间;进而分析两药联合处理后对U251-MG增殖的影响。分组:对照
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目的:通过体外细胞实验,观察青蒿琥酯（ART）与替莫唑胺（TMZ）联合作用对U251细胞（U251-MG）的增殖、迁移及凋亡的影响,蛋白质印迹法（Western Blotting）检测Bcl-2的表达进一步探讨其可能的作用机制。方法:通过体外细胞实验,MTT分析U251-MG的增殖能力,从而确定后续实验所需ART及TMZ的合适浓度和时间;进而分析两药联合处理后对U251-MG增殖的影响。分组:对照组,ART组（50μM）,TMZ组（200 μM）,ART+TMZ组（ART 50 μM+TMZ 200μM）,按以上分组分别将其加入药液后培养48 h。用Annexin V-FITC和PI双重染色,通过流式细胞术确定细胞凋亡状态,并用软件分析。细胞划痕法检测U251细胞迁移的情况。Western Blotting检测Bcl-2蛋白的表达。结果:1.ART与TMZ对U251细胞增殖抑制的影响:通过MTT法,我们发现:不同浓度ART作用后,随着浓度和时间的增加,U251-MG的细胞增殖抑制率逐渐增加。当ART50μM处理细胞48h时,其对细胞的抑制率达到（52.78±1.31）%,且与其他浓度比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）。经计算得出ART在48 h对U251细胞的IC50约为46.54 μM。不同浓度的TMZ处理细胞48 h后,随着浓度的增加,细胞增殖抑制率也逐渐增加,当TMZ浓度为200 μM时,细胞增殖抑制率可达到（52.79±0.64）%,与50、100、400μM 比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）,计算得出TMZ IC50为183.70μM。因此,选取ART50μM、TMZ 200μM,分别处理48 h作为后续实验的处理因素。两药联合应用作用48 h后,细胞增殖抑制率为（69.63±0.82）%,与ART组、TMZ组相比,均具有统计学意义（P＜0.05）。2.ART、TMZ以及联合用药诱导U251细胞凋亡的影响:利用流式细胞术分析,凋亡率分别为:对照组（6.45±0.08）%,ART组（22.10± 0.22）%,TMZ 组（22.16± 1.01）%,ART+TMZ 组（36.05± 0.14）%。与对照组相比,两单用药组差异均具有统计学意义（P＜0.05）。ART+TMZ组,同单独用药组比较明显提高（P＜0.05）。3.通过划痕实验,我们能够看到:单独用ART、TMZ与对照组相比具有明显差异（P＜0.05）,而ART+TMZ组与对照组、ART组以及TMZ组间也具有明显差异（P＜0.05）。4.Bcl-2蛋白表达情况:与对照组相比,ART组、TMZ组中Bcl-2蛋白表达量下调（P＜0.05）;且ART+TMZ组中下调更明显（P＜0.05）。结论:ART、TMZ均可通过药物浓度依赖的方式抑制U251细胞的增殖;ART联合TMZ具有协同抑制神经胶质瘤U251细胞的增殖、迁移和诱导凋亡的作用,其机制可能与凋亡相关蛋白Bcl-2表达的改变有关。
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