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β-1,3-1,4-葡聚糖酶是食品、饲料等轻工业行业中重要的糖苷水解酶之一,其广泛应用于啤酒糖化、寡糖制备等过程,并且也是常用的饲料添加剂。由于具有重要应用价值,目前针对β-1,3-1,4-葡聚糖酶开发的研究越来越受到重视。因此,基于前期研究结果,本研究对泡盛曲霉CAU33中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因AaBglu12A进行了表达、性质和应用研究,获得以下主要结论:1.从泡盛曲霉CAU33克隆获得β-1,3-1,4葡聚糖酶基因AaBglu12A,该基因编码239个氨基酸,编码区含有两个内含子,长度分别为48 bp和66 bp;预测AaBglu12A编码的成熟蛋白分子量为24.17 kDa,等电点为4.63;通过氨基酸序列比对推测AaBglu12A为新型GH 12家族β-1,3-1,4-葡聚糖酶;在毕赤酵母表达系统中成功表达AaBglu12A,通过高拷贝筛选获得具有高β-1,3-1,4-葡聚糖酶产酶活性的克隆,并且在5-L发酵罐中进行高密度发酵,其发酵上清液酶活力达到159500 U/mL,蛋白质含量达到31.7 mg/mL,菌体湿重达到404 g/L,达到了较高的β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵水平。2.将发酵获得的β-1,3-1,4-葡聚糖酶AaBglu12A的粗酶液经过Q-Sepharose FF阴离子交换柱一步纯化得到了电泳级纯酶,其比酶活达到7049 U/mg;SDSPAGE凝胶电泳法和凝胶过滤色谱法所测定的AaBglu12A的分子量分别为23.6kDa和23.2 kDa,表明AaBglu12A为单亚基蛋白;酶学性质结果表明AaBglu12A的最适pH为5.0,在pH 2.0-9.0之间保持稳定;AaBglu12A的最适温度为55°C,在60°C以下保持稳定;AaBglu12A对β-1,3-1,4-葡聚糖具有严格底物特异性,其对大麦和燕麦β-葡聚糖的水解产物主要为三糖和四糖,对地衣多糖的水解产物为以三糖为主的DP 2-4的葡寡糖。3.将纯化获得的AaBglu12A应用于啤酒糖化工艺,当加入70 U/g麦芽的AaBglu12A时,麦芽汁粘度降低9.61%,过滤时间缩短34.5%,该结果优于大部分目前所报道的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,表明AaBglu12A在啤酒酿造过程具有良好的工业应用价值;在从燕麦麸皮制备葡寡糖的应用研究中,通过单因素实验优化了AaBglu12A葡寡糖的酶解制备条件,当固液比为1:20、酶解温度为50°C、酶解加酶量为100 U/g燕麦麸皮、酶解时间4h时,葡寡糖得率最高,达到90%,表明AaBglu12A在葡寡糖的制备方面具有优良的工业应用潜力。