本试验通过PK-15细胞增殖猪细小病毒(PPV)，待细胞出现80％病变时，收获病毒细胞培养物，经反复冻融、超声波处理后，利用聚乙二醇6000浓缩病毒，葡聚糖G-200凝胶过滤的方法纯化病毒，得到了纯度较高的PPV。将纯化的PPV分别免疫家兔和豚鼠，制备了兔抗及豚鼠抗PPV的高免血清。经饱和硫酸铵沉淀、葡聚糖G-25脱盐后，获得了羊抗兔、兔抗及豚鼠抗PPV免疫球蛋白IgG的粗提物，DEAE-32离子交换层析纯化了羊抗兔IgG。以过碘酸钠法和柠檬酸三钠一鞣酸混合还原法分别制备了高纯度的羊抗兔辣根过氧化物酶标记抗体及胶体金标记抗体。 依据方阵测定法，通过对兔抗PPV IgG、豚鼠抗PPV IgG及标记抗体的最佳使用浓度的确定，建立了双夹心ELISA、Dot-ELISA和免疫金银染色法(IGSS)3种用于检测PPV抗原的免疫学方法。经重复性试验、特异性阻断及交叉试验，结果表明：3种检测方法具有特异性强、重复性高的优点。通过敏感性试验及其与血凝试验(HAT)的比较，结果发现Dot-ELISA检测PPV的敏感性较低，PPV最低检出量为0.1病毒血凝(HA)单位，双夹心ELISA和IGSS敏感性较高，PPV最低检出量能达到0.05HA单位。 根据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列，合成了一对寡核苷酸引物，分别利用酚-氯仿一次抽提法、酚-氯仿二次抽提法及煮沸法制备模板DNA，减少病毒核酸的提取时间、费用，成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段，经EcoR Ⅰ酶切鉴定，证实了该扩增片段的特异性。经敏感性试验测定，PCR的最低检出量为0.008HA单位。由于PPV基因组结构为单股负链DNA病毒，且扩增片段仅有158bp，本试验省去了模板的预变性，直接进入PCR循环，其扩增结果与原来基本一致，通过缩短PCR循环中变性、退火及聚合的时间，同样也扩增出了特异性条带，但经敏感性测定比原来减少了一个病毒滴度。 应用本试验建立的4种不同的检测方法及HAT对26例临床样本进行检测，阳性检出率由高到低的顺序依次为：PCR最高，其次是双夹心ELISA和IGSS，最后为间接Dot-ELISA。10例PPV感染阳性病例，其中6例胎盘坐高小于16厘米，双夹心ELISA、IGSS和PCR检测结果全部为阳性，间接Dot-ELISA能检测出5例、HAT能检测出3例；其余4例只有PCR才能检测到病毒的存在。