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GMI(Ganoderma Microsporum Immunomodulatory protein)是从小孢子灵芝中提取的一种免疫调节蛋白,它有着强的水溶性与低毒性。目前,已证实了 GMI对肿瘤细胞有一定的抗增殖作用、抗转移与侵袭、逆转耐药、影响细胞凋亡与细胞自噬等作用。其主要是通过影响肿瘤发生发展的多个步骤与环节来发挥抗肿瘤活性作用。本研究主要围绕GMI对乳腺癌细胞株的增殖、凋亡以及自噬方面进行研究,深入研究GMI对乳腺癌细胞株的细胞自噬影响。再通过联用化疗药物阿霉素,在降低阿霉素剂量的同时,提高其对乳腺癌的抑制能力,为将来实现临床用药奠定基础。目的观察不同浓度的GMI及其联合阿霉素对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MX-1细胞增殖、细胞凋亡、细胞自噬等的影响。方法以GMI 10、20、40 μ g/ml的浓度和ADR 0.5、1、2 μ g/ml浓度的处理肝癌细胞,用MTT法检测药物对细胞增殖的影响以及联合ADR的联合指数;CFSE探针法检测GMI对乳腺癌细胞株增殖指数的影响;用集落形成实验检测GMI单药以及联合ADR对乳腺癌细胞株增殖能力的影响;用免疫荧光显微镜及流式细胞仪检测GMI单药及联合ADR对细胞凋亡的影响;通过透射电镜检测GMI是否诱导细胞产生自噬小体、自噬溶酶体以及凋亡小体;Western blot方法检测的PARP、Cleaved-PARP、Caspase 家族、C-Raf、p-C-Raf、Erk 1/2、p-Erk 1/2、Ras、Foxo3a、STAT3、p-STAT3、Jak-2、p-Jak 2、C-Myc、ATG-7、LC-3 及 P62 的表达。通过构建裸鼠皮下异种移植瘤模型,检测GMI对乳腺癌细胞MCF-7体内抗肿瘤活性作用以及对其载瘤生存期的作用。通过构建裸鼠肺转移模型,检测GMI对乳腺癌细胞MCF-7体内抗转移活性作用。结果GMI、ADR作用于乳腺癌细胞48h后,对细胞增殖的抑制呈时间和浓度依赖关系。GMI联合ADR对乳腺癌细胞有协同作用,各乳腺癌细胞株48h的联合指数均小于1。通过透射电镜(TEM)检测GMI的自噬溶酶体蓄积明显;Western blot检测结果显示GMI可抑制细胞增殖相关蛋白表达,C-Raf、Erk1/2、p-C-Raf、p-Erk1/2、Foxo3a、Ras、p-STAT3、STAT3、C-Myc 表达下降;GMI 单药及联合用药促进乳腺癌细胞凋亡,PARP蛋白、Caspase家族蛋白表达随药物浓度增加或药物作用时间延长而降低,cleaved Caspase家族蛋白、cleaved PARP蛋白表达随药物浓度增加或药物作用时间延长而增加;GMI单药抑制乳腺癌细胞的自噬,促进自噬相关蛋白LC-3、P62蓄积,呈时间浓度依赖性。GMI与ADR联用后,促进自噬相关蛋白LC-3、P62蓄积,PARP蛋白、Caspase家族蛋白表达上调。GMI高浓度组对乳腺癌MCF-7皮下移植瘤有一定的抑制作用,而GMI低浓度组能明显提高裸鼠的载瘤生存期。并且GMI高浓度组对乳腺癌MCF-7的肺转移有一定的抑制作用。结论GMI能够抑制乳腺癌细胞的增殖,影响其细胞周期进程,并抑制其晚期自噬,诱导乳腺癌细胞凋亡,有一定的体内抗肿瘤作用,能延长体内载瘤生存期,并具有一定抗转移作用。联用ADR后,能降低ADR诱导的早期保护性自噬,提高乳腺癌细胞对ADR的敏感度,增加其凋亡率,提高抑瘤能力。