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目的: 肿瘤转移相关蛋白-1(MTA1)是核小体重构及去乙酰化蛋白复合体(NuRD)的重要组成部分,已有研究发现其在前列腺癌转移过程中发挥重要作用,但目前未见 MTA1与前列腺癌细胞耐药的相关研究。本研究的目的在于探讨产生多西他赛(DTX)耐药性后的PC-3细胞 MTA1的表达,以及上调或下调 MTA1表达对前列腺癌PC-3细胞DTX耐药性的影响。 方法: 1.使用梯度浓度DTX长期体外诱导培养耐药性PC-3细胞—PC-3R,并使用实时定量PCR, Western Blotting和启动子活性分析研究MTA1在正常前列腺细胞、PC-3细胞以及PC-3R细胞的表达。 2.使用 MTA1 siRNA干扰内源性 PC-3细胞 MTA1的表达,再给予 DTX,观察细胞增殖及凋亡的变化,并研究增殖及凋亡相关分子的表达。 3.使用 His-tagged MTA1质粒转染 PC-3细胞,在体外及体内实验中研究过表达MTA1对PC-3细胞DTX耐药性的影响。 结果: 1.经过多次使用含 DTX培养基的细胞培养液诱导 PC-3细胞,分别经历8nM DTX诱导48h×7个循环和12nM DTX诱导48h×12个循环后,耐药性PC-3R细胞构建成功。PC-3R细胞对DTX的IC@50值显著高于对照组PC-3细胞(P<0.05),在20 nM及80 nM DTX作用下的细胞凋亡率显著低于对照组PC-3细胞(P<0.05)。实时定量PCR和Western Blotting研究提示MTA1在耐药性PC-3R细胞中表达显著升高(P<0.05),启动子活性分析提示PC-3R细胞中MTA1启动子活性显著高于对照组PC-3细胞(P<0.05)。 2.使用MTA1 siRNA转染PC-3细胞,特异性的抑制MTA1的表达。流式细胞仪细胞凋亡检测结果提示在DTX处理后,敲除MTA1的PC-3细胞的凋亡率显著高于对照组细胞(P<0.05)。Western Blotting提示敲除MTA1的PC-3细胞在DTX处理后细胞内 pAkt的表达水平显著低于转染阴性对照 siRNA的PC-3细胞(P<0.05),而凋亡蛋白cleaved PARP表达较对照组显著升高(P<0.05)。 3.过表达 MTA1的PC-3细胞在体外实验中对 DTX的耐药能力增加,凋亡减少。体内实验中,在接受DTX腹腔注射前过表达MTA1的PC-3细胞在裸鼠皮下的成瘤能力以及生长速度与对照组 PC-3细胞相比无显著差异(P>0.05)。但在裸鼠接受DTX腹腔注射后,过表达MTA1的PC-3细胞在体内的生长速度明显高于对照组细胞(P<0.05),移植瘤cleaved caspase3表达显著低于对照组细胞,而Ki67核染色阳性率显著高于对照组细胞(P均<0.05)。 结论: MTA1在对 DTX产生耐药的PC-3R细胞中高表达。内源性 MTA1被抑制后, PC-3细胞对DTX敏感,凋亡增加。MTA1过表达在体内外实验中降低DTX诱导的PC-3细胞的凋亡率,使 PC-3细胞产生针对 DTX的抵抗能力。MTA1参与了 PC-3细胞针对 DTX的耐药性的产生过程,针对 MTA1为靶标的治疗可能抑制前列腺癌对DTX耐药。