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目的:探究siRNA下调含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(SETD8)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及分子机制,并可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤MG-63细胞的上述生物学行为。方法:(1)采用脂质体转染法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,该组标记为SETD8-siRNA组或实验组;以构建沉默SETD8基因表达的MG-63细胞系,将杂序siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,该组标记为control-siRNA组或对照组;未经siRNA转染的MG-63细胞,该组标记为未转染组或空白组。用CCK-8细胞毒性活性检测法检测上述三组骨肉瘤MG-63细胞的增殖情况,用平板克隆法检测各组的MG-63细胞的克隆情况,用AO-EB荧光双染色法检测各组细胞凋亡情况。用实时荧光定量PCR法检测MG-63细胞中增殖及凋亡相关分子β-catenin,cyclinD1,caspase-9及bcl-2的mRNA的表达水平,并用蛋白质印迹法检测MG-63细胞中上述分子的蛋白表达情况。(2)采用脂质体转染法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,该组标记为SETD8-siRNA组或实验组;以构建沉默SETD8基因表达的MG-63细胞系,将杂序siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,该组标记为control-siRNA组或对照组;未经siRNA转染的MG-63细胞,该组标记为未转染组或空白组。用划痕愈合法检测上述各组MG-63细胞的迁移能力,用Transwell小室法检测三组中MG-63细胞的侵袭及迁移情况。用实时荧光定量PCR法检测MG-63细胞中侵袭及迁移相关分子vimentin和mmp-3的mRNA的表达水平,并用蛋白质印迹法检测MG-63细胞中上述分子的蛋白表达情况。结果:(1)SETD8基因转染入骨肉瘤MG-63细胞后,实验组SETD8基因的mRNA及蛋白表达较对照组及未转染组组均下调(P<0.05)。CCK-8实验结果显示,SETD8-siRNA组较control-siRNA组及未转染组,细胞的增殖能力明显下降(P<0.05)。平板克隆结果显示,SETD8-siRNA组较control-siRNA组及未转染组,细胞自我克隆能力显著降低(P<0.05)。AO-EB染色实验结果显示,SETD8-siRNA组较control-siRNA组及未转染组来说,细胞凋亡情况明显增多。此外,实时荧光定量PCR实验显示,在实验组中,β-catenin,cyclinD1和bcl-2的mRNA的表达水平较对照组及空白组明显下降(P值均<0.05),而caspase-9mRNA的表达水平较对照组及空白组显著上调(P<0.05)。蛋白质印迹法实验结果显示,SETD8-siRNA组中β-catenin,cyclinD1和bcl-2蛋白的相对表达水平较control-siRNA组及未转染组明显减小(P值均<0.05),而caspase-9蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。(2)划痕愈合实验显示,SETD8-siRNA组中的骨肉瘤细胞迁移能力较其余两个组而言,明显下降(P<0.05)。Transwell小室法测得的结果显示,实验组中MG-63细胞的侵袭及迁移能力较对照组及空白组明显降低(P<0.05)。另外,经实时荧光定量PCR实验测得,在SETD8-siRNA组中,vimentin及mmp-3的mRNA的相对表达水平较control-siRNA组及未转染组显著下降(P值均<0.05),对应的vimentin及mmp-3蛋白,在实验组中的表达量也远低于对照组及空白组(P值均<0.05)。结论:(1)下调SETD8基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力并诱导骨肉瘤MG-63细胞产生凋亡。(2)下调SETD8基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭及迁移能力。(3)SETD8基因可能通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤MG-63细胞的上述生物学行为。