基因芯片技术在食源性致病微生物检测中的应用研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dongge5266
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
建立一种运用基于PCR技术的基因芯片方法检测和鉴定志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157、霍乱弧菌、副溶血弧菌和单增李斯特菌的方法,为7食源性致病微生物的快速检测和鉴定提供了准确、快速、灵敏的方法。分别选取16S rDNA和重要致病基因,包括志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、金黄色葡萄球菌凝固酶基因(coa)、沙门氏菌肠毒素基因(stn)、致泻性大肠杆菌O157志贺样毒素基因(slt)、霍乱弧菌溶血素基因(hly)、副溶血性弧菌编码TOXR蛋白基因(toxR)和单细胞增生李斯特菌编码clpE蛋白基因(clpE)设计引物和探针,进行PCR试验和基于不对称多重PCR技术的芯片试验,产物与含特异性探针的芯片杂交,并通过25株菌来评价该方法的性能。对7种实验细菌共25株进行检测,由芯片扫描仪输出的信号值表明,目标菌均得到阳性结果,其它非目标菌均为阴性结果,仅在以16S rDNA为靶基因的芯片试验中志贺氏菌、沙门氏菌和大肠杆菌O157存在假阳性。该方法对志贺氏菌、沙门氏菌和大肠杆菌O157的基因组DNA的检测限约为8 pg,对食品样品中的志贺氏菌、沙门氏菌和大肠杆菌O157的灵敏度为50 CFU/mL,同时进行了多重PCR电泳检测,基因组DNA的检测限约为16 pg检测,食品样品中的灵敏度为100 CFU/mL。本研究针对16S rDNA基因和与毒性密切相关的特异性基因建立的基于不对称PCR的芯片检测方法,对食源性致病微生物进行全面检测。该方法与现有的微生物检测方法相比,特异性更强、灵敏度更高,为食源性微生物的快速检测鉴定提供了新的发展方向,具有较强的实用意义和推广价值,适用于出入境检验检疫机构。
其他文献
采用二代测序技术对1例以牙本质发育不全为主要临床表现的Ⅲ型成骨不全患者及其父母进行致病基因鉴定,并对临床和遗传资料进行分析.测序结果显示,患者Ⅲ型成骨不全相关基因CO
期刊
@@
杏鲍菇是我国著名的食药用菌,目前杏鲍菇的市场前景很好,这种珍稀食用菌的工厂化栽培在国内外备受关注。杏鲍菇的栽培研究已广泛开展,但关于育种方面的研究较少,在杏鲍菇的产业发
风能作为清洁、可再生能源有着广阔的发展前景,然而,深入开展风力发电仍然受到部分的限制,这是由于风力具有间断的和波动的特性。要使风能在电力系统中得到大规模的发展,就需要研究并解决这一问题。若能增加储能部分,使风力发电运行“平稳”和“可靠”,则风力发电就能够得到深度开发。应用压缩空气蓄能(CAES)系统可有效地解决这一问题。压缩空气蓄能电站是一种新型电能存储系统,具有经济性好、负荷范围大等优点,该系统
本文报道1例重度牙周炎经牙周非手术治疗后病理性移位牙齿自发回位的病例,该病例按牙周炎新分类为Ⅳ期C级.疾病特点是患者存在明显的咬合紊乱并构成其相互影响相互作用的多种
期刊
@@
MRI是评估颞下颌关节紊乱病的重要工具,尤其是对于关节盘的形态及移位评估具有重要价值.因此,了解颞下颌关节MRI的适应证、禁忌证、扫描方案及成像参数对于颞下颌关节磁共振
期刊
@@
儿童口呼吸问题日益受到医学界和社会的关注,口呼吸可分为习惯性和病理性口呼吸.其中由于腺样体和(或)扁桃体肥大导致的病理性口呼吸往往是儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合