帕金森病以震颤、麻痹、运动迟缓、肌肉僵直等为主要临床症状,是目前最为常见的中枢神经系统退行性疾病之一。从1817年发现至今,关于帕金森病的研究一直在不断地进行,然而,至今发病机制仍不明确。帕金森病最主要的病理学特征是黑质纹状体通路上的多巴胺能神经元受损,进而导致了纹状体多巴胺含量减少,由于神经递质兴奋与抑制的不平衡,而表现出个体运动方面的障碍。随着研究的不断深入,各种治疗方案广泛地应用于帕金森病治疗研究当中。主要包括不同的给药方式:口服药物、脑部手术、细胞移植、基因治疗等;以及针对不同症状及病理特征的不同治疗靶点:多巴胺合成替代、神经营养因子保护、组蛋白去乙酰化、α突触核蛋白、小胶质神经元、遗传相关基因等。而目前的研究重点,除了探究确切的发病原因以及寻找更多更为有效的靶点之外,更为重要的是,在已知的范围内,选择适当的治疗靶点,以适合的给药手段,达到最佳的治疗效果。CDNF即保守性多巴胺神经营养因子,于2007年被发现,是一种在大脑皮质、黑质、心脏、肝脏、小脑、骨骼肌等多种部位表达的分泌蛋白。研究表明,CDNF能够对多巴胺能神经元产生显著的保护及修复作用,且效果优于GDNF、MANF等其它类型的神经营养因子。CDNF的发现为神经营养因子在帕金森病治疗中的应用提供了更加美好的前景。因此,本论文选取了神经营养因子CDNF为主要治疗靶点,采用基因治疗的给药手段,以8型腺相关病毒为基因治疗载体,对6-OHDA损伤的帕金森大鼠模型进行治疗,探讨了 CDNF对神经系统的保护以及修复作用。论文首先构建了 pAAV-CDNF等表达质粒,并以三质粒共转的方法成功包装了三种重组腺相关病毒:AAV-CDNF、AAV-RFP、AAV-AADC,并对其进行了纯化和滴度检测。然后,通过CDNF对6-OHDA损伤的PC12细胞保护作用的研究实验,在细胞水平上证明了 CDNF对于6-OHDA造成的神经损伤,具有明显的保护效果。在体内实验中,我们采用6-OHDA损伤帕金森大鼠模型进行研究,证明了在损伤早期,CDNF能够明显改善损伤大鼠经阿扑吗啡诱导的旋转行为,且TH阳性细胞检测结果表明,黑质内受损的多巴胺能神经元得到了明显的修复;而在损伤晚期,CDNF也表现出了较好的治疗效果,与对照组相比,显著降低了旋转行为,并且对黑质多巴胺能神经元有一定的修复效果;为了在损伤晚期的治疗中获得更好的治疗效果,尝试了 CDNF与多巴胺合成替代联合使用的策略,在实验中,联合治疗组表现出了比单一治疗组更理想的治疗效果,大大的降低了帕金森大鼠模型的旋转数,不但TH阳性细胞检测结果与单一 CDNF靶点治疗结果相似,并且纹状体多巴胺浓度有了较大的增加。本论文研究表明,以AAV-8为载体的基因治疗,能够使目的基因在大鼠纹状体内高效且长时间的表达,而CDNF在体内及体外均具有良好的神经保护作用,可以作为有效的治疗靶点应用于后续研究。另外,本研究中采用的神经营养因子(CDNF)与多巴胺合成替代(AADC)联合使用的方法,对于损伤晚期的患者将有可能发挥更好的治疗作用。本论文的研究为帕金森病的基因治疗提供了新的思路,也为后续的临床前研究奠定良好的基础。