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前言:
胃癌的发病是一个多因素，多阶段的复杂发展过程，涉及多种基因调控的异常改变。迄今为止的研究表明：幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染和胃癌的发生密切相关，已被WHO列为I类致癌因子。环氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是花生四烯酸代谢成前列腺素过程中的限速酶，COX不仅是启动炎症反应的关键酶，还与原癌基因的突变、肿瘤促进因子、细胞因子及其受体乃至病原菌如H.pylori感染有关。血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactors，VEGF)是刺激肿瘤血管、淋巴管生成的主要细胞因子。本实验是在现有的研究基础上，通过观察各种病变的胃粘膜组织中H.pylori感染与COX-2，VEGF的表达水平，探讨三者在癌前病变组织内的相互关系，进一步评估在胃癌癌前病变组织与胃癌组织中三者的表达有何异同，阐明H.pylori感染是通过诱生COX-2再促进VEGF的表达，还是H.pylori感染直接刺激VEGF的表达，或两者兼有，以期为临床应用COX-2抑制剂、选择性血管抑制剂，预防和治疗H.pylori相关性胃疾病提供理论依据。
材料与方法:
标本：收集2007年11月-2008年12月因上消化道症状于我院行胃镜检查取病理活检者172例(除外2个月内接受过抗H.pylori治疗及服用过NSAID者)，男80例，女92例，年龄35岁-80岁，平均年龄53±12岁。其中慢性浅表性胃炎(chronicsuperficialgastritis，CSG)胃粘膜组织36例；慢性萎缩性胃炎(chronicatrophicgastritis，CAG)胃粘膜组织36例，均不伴有肠化和(或)不典型增生；中度以上的肠上皮化生胃粘膜组织(intestinalmetaplasia，IM)44例，肠化不伴有萎缩及不典型增生；中度以上不典型增生胃粘膜组织(dysplasia，DYS)56例。
主要试剂：鼠抗人COX-2单克隆抗体；兔抗人VEGF多克隆抗体；免疫组化SABC染色试剂盒和DAB显色液；伊红；Giemsa染色液主要仪器：石蜡切片机、冰箱、微波炉、奥林巴斯显微镜实验方法：以HE染色后光学显微镜下见“S”型弯曲杆状细菌和改良Giemsa染色后镜下见典型的紫兰色螺旋样菌为H.pylori阳性，两项均阳性者即诊断为H.pylori感染；免疫组织化学SABC法测胃粘膜组织中COX-2、VEGF的表达，以PBS替代-抗作阴性对照，用已知COX-2和VEGF表达阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照，阳性细胞为胞浆内和(或)细胞核内出现棕黄色颗粒，采用病理图文报告分析系统进行平均光密度测定，将免疫组化染色结果转化为平均光密度值(averageopticaldensity，AOD)进行定量分析；应用SPSS11.5统计软件包进行x2检验、单因素方差分析、Scheffe法、t检验及Pearson相关性检验的统计学分析，P<0.05表示有统计学差异，P<0.01表示有显著统计学差异。
结果:
(1)不同病变胃粘膜组织中H.pylori表达以DYS组最高76.8％，其次为IM组63.6％，CAG组58.3％，CSG组最低27.8％，各组之间统计学处理差异显著(P<0.01)。
(2)COX-2蛋白的平均光密度值(AOD)CSG组最低13.81±5.53，CAG组为45.28±21.44，IM组为73.67±26.02，DYS组最高为91.23±45.11，IM、DYS组间的表达程度无统计学差异(P>0.05)，余各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)，IM、DYS与CSG组间差异显著(P<0.01)。VEGF蛋白的AOD值CSG、CAG、IM三组分别为1.00±1.18、1.48±1.24、1.58±0.90，三组间差异不显著，无统计学意义，但与DYS组9.54±9.15比较差异显著(P<0.01)。
(3)H.pylori感染与COX-2表达的关系：COX-2在H.pylori感染阳性CAG、IM及DYS组的表达程度明显高于H.pylori感染阴性组，尤其IM和DYS组内差异显著(P<0.01)。
(4)H.pylori感染与VEGF表达的关系：VEGF的表达程度在H.pylori感染阳性与H.pylori感染阴性组间差异无统计学意义(P>0.05)。
(5)COX-2与VEGF的相关性分析：随着胃粘膜病变程度的加重，COX-2与VEGF的表达水平成明显正相关性(r=0.640，P<0.01)。
讨论:
IM和DYS统称癌前病变，是胃癌发生的不同阶段，H.pylori感染是公认的胃癌I类致癌因子，主要作用于癌变的起始阶段。在本实验中我们发现H.pylori感染率在DYS组最高，其次为IM、CAG、CSG，各组之间比较具有显著性差异(P<0.01)，证明H.pylori感染在胃癌发生的早期即起一定作用，随着病变的加重H.pylori感染率逐渐升高。近年研究表明，COX-2有促进细胞增生、抑制细胞凋亡、调节肿瘤新生血管形成的促癌作用。本实验研究结果显示COX-2蛋白的表达程度在CSG组最弱，随着病变程度的加重其表达呈递增趋势，IM、DYS两组之间的表达程度无差异(P>0.05)，余各组之间差异显著(P<0.05)，尤其IM、DYS与CSG组之间比较差异显著(P<0.01)，提示COX-2在癌前病变的胃粘膜组织即开始较高表达，且COX-2表达的上调程度与胃粘膜病变程度有关，分析其机制可能为：长期H.pylori感染引起胃粘膜上皮损伤诱导COX-2的表达，导致包括COX-2的多个原癌基因激活，抑癌基因失活，粘膜细胞增殖与凋亡失衡。VEGF是目前了解最为深入的血管生成家族，其作用是刺激肿瘤血管、淋巴管生成，在胃癌的早期即有所分泌，参与微血管的形成，而微血管的生成直接影响胃癌的发生、发展及预后。本试验结果，在CAG、IM及DYS胃粘膜病变的不同阶段，H.pylori阳性胃粘膜病变组织的COX-2的表达程度均高于H.pylori阴性者，尤其IM及DYS组差异更加明显，说明H.pylori感染可以使COX-2表达增强，并且可能主要作用在胃癌发生的前期；H.pylori感染各阶段的胃粘膜病变组织VEGF的表达无统计学差异，即H.pylori感染对VEGF在胃粘膜病变中的表达无影响；但随着胃粘膜病变程度的加重，COX-2与VEGF的表达水平成明显正相关性，其可能的机制是COX-2通过催化合成前列腺素PGE2、诱导VEGF表达上调，而VEGF又通过KDR信号传导通路进一步诱导COX-2表达，二者通过相互作用而促进肿瘤血管生成，加速胃癌癌前病变向胃癌发展的进程。因此H.pylori感染诱导COX-2的表达上调，COX-2的高表达又促使了VEGF的表达，在胃癌癌前病变向胃癌的发展中起重要作用。由理论推知进行临床除菌治疗、应用选择性COX-2抑制剂及血管抑制剂，可以在一定程度上预防胃癌癌前病变向胃癌的转化。
结论:
(1)COX-2表达在DYS中最强；VEGF在胃粘膜病变初期呈微弱表达，仅在DYS时始表达增强。
(2)H.pylori感染的CAG、IM、DYS粘膜组织COX-2表达增强，H.pylori感染与VEGF表达无关，提示H.pylori感染可能通过上调COX-2的表达而起到致癌作用。
(3)随着胃粘膜病变程度的加重，COX-2与VEGF的表达正相关，而VEGF仅在不典性增生中呈一定水平的表达，推测在胃癌的形成过程，表达逐步增强的COX-2可能促使了VEGF的表达。