植物甾醇-卵磷脂脂质体构建及其在IgY包载的应用

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jsj19871027
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脂质体由于其具有的生物相容性、靶向性、可控释放性等特点,多用于各种药物的包封。本文以植物甾醇代替一般脂质体中所采用的胆固醇,通过比较研究构建了谷甾醇一卵磷脂脂质体体系,用以考察该体系对于活性蛋白物质的保护作用。所选用的蛋白是从鸡蛋中提取的免疫球蛋白IgY(Immunoglobulin ofYolk)。免疫球蛋白在胃肠道中能发挥其被动免疫功能,增强人体免疫力。但是胃液、肠液,尤其是胃液的酸性环境和蛋白酶水解对于免疫球蛋白的破坏性很大。本实验所构建的谷甾醇一卵磷脂脂质体,有助于在胃肠中保护免疫球蛋白的活性。 论文首先以稳定性和包封率为考察指标,比较了几种常见植物甾醇-谷甾醇、豆甾醇及麦角固醇制备的脂质体,最终确定谷甾醇为其中最优的卵磷脂脂质体配方材料。以谷甾醇-大豆卵磷脂脂质体为模型,考察其对不同分子量大小的蛋白组分(Mr=14000~180000 Da)的包封情况,结果显示:在考察的分子量范围内,不同蛋白质采用相同的制备方法其包封率无显著性差异,说明该体系具有相当的适配性。 选择琼脂糖凝胶CL-2B为分离介质,可以较好地实现IgY脂质体与游离IgY之间的分离,并研究确认Lowry法为脂质体体系中游离IN含量的较理想测定方法。 论文以鸡蛋为原料,采用水稀释和硫酸盐分级沉淀相结合的方法提取实验所需的IgY,经冷冻干燥IgY提取物的蛋白含量达92.53%,IgY占80%以上,其中具有活性的IgY占39.5%。以谷甾醇.脂质体对IgY的包封率最大化为目标,对其工艺制备过程进行了优化。选取甾醇/磷脂质量比、配方蛋白总量、介质pH为考察因素,根据预备实验及参考文献确定三因素的水平范围,以包封率为响应值,利用SAS软件进行实验设计与数据分析,得出的最优化组合为:甾醇/磷脂质量比1:1、介质pH值8.5、配方蛋白总量12 mg,谷甾醇脂质体对IN的包封率预测值为66.045%。按此组合进行验证实验,平均包封率为61.5%,接近预测值,说明该软件的设计模型有效。 模拟胃肠道环境,考察谷甾醇脂质体对所包载IgY的保护作用,结果表明:游离的IgY在人工胃液中1 h内基本失活,而脂质体包载的IgY经人工胃液作用1 h活性残留率为49.8%,2 h后活性残留为44.3%;游离IgY有一定的胰蛋白酶耐受性,作用2 h,活性残留在50%以上,包载在脂质体中的IgY经人工胰液作用2 h,活性保留率在90%以上。说明谷甾醇脂质体有助于提高IgY免受胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶破坏的能力,IgY包载于该脂质体有望成为口服制剂或食品添加剂,用以增强人体的被动免疫能力。论文还比较了胆固醇一卵磷脂脂质体与谷甾醇.卵磷脂脂质体对IgY的保护作用效果,结果表明后者效果更佳。
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