葡萄糖转运蛋白在大鼠睾丸中的表达及其调控研究

来源 :厦门大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yhch157
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在哺乳动物中,睾丸间质组织合成分泌的睾酮在胚胎发育的雄性化、精子的生成、雄性性行为以及雄性性腺的发育等生理过程中起着重要的作用。生理条件下,睾丸间质细胞合成分泌睾酮主要受到垂体分泌的LH/hCG及有关生长因子和细胞因子的调控,同时,葡萄糖是睾丸间质细胞合成睾酮的必需条件。在机体中,葡萄糖转运蛋白(GLUTs)是将葡萄糖等单糖分子转运进入组织细胞的主要载体。然而,睾丸间质细胞中葡萄糖转运蛋白将葡萄糖摄入细胞的过程受哪些因素调节以及调控机理的研究报道还非常有限。本文研究LH/hCG、生长因子和细胞因子对睾丸间质细胞中葡萄糖转运过程的影响以及和睾酮生物合成和分泌的关系,为进一步深入探讨细胞中类固醇激素的合成分泌与葡萄糖的代谢的关系提供依据。 本文首次采用RT-PCR技术探讨GLUT8基因在大鼠睾丸组织和睾丸间质细胞中表达的特异性。结果首次证实,GLUT8基因主要在大鼠的睾丸中表达,在心脏和肾脏中有少量表达,而在脾脏和肝脏中只有微量的表达。而在睾丸粗间质细胞、睾丸Leydig细胞、睾丸生精细胞和附睾精子细胞中GLUT8基因有很丰富的表达,说明GLUT8主要分布在Leydig细胞和精子细胞中。RT-PCR数据还显示,在20d龄的青春前期大鼠的不成熟睾丸和心、肝、肾、脾等其它组织器官中,GLUT8基因表达水平相对于成年大鼠要低一些。 本文采用改良的Klinefel ter方法分离获得纯度为98%、存活率为95%的大鼠Leydig细胞,并用RT-PCR和Western Blotting技术,研究原代培养的Leydig细胞中,hCG、IGF-1和三种细胞因子(IL-lα,TNF-α和IFN-γ)对GLUT8基因表达的调控作用及对睾酮合成的影响。研究结果首次证明了hCG可极显著增加细胞中GLUT8基因mRNA的表达水·摘要·平(P<0.001),且和hCG剂量与作用时间成正相关。此外,IGF一l(100ng/mL)也可以增加GLUTS基因的表达(P<0 .01),并且可以和hCG协同作用,显著提高大鼠Leydig细胞中GLUTS基因在mRNA和蛋白质水平的表达。该结果与IGF一l(100 ng/mL)和hCG(10 ng/mL)协同作用可极显著增加辜酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。 研究还发现,GLUTI和GLUT3基因在大鼠Leydig细胞中也有一定程度的表达。hCG(1 0 ng/mL)或IGF一l(100 ng/mL)单独或共同作用于细胞均不能影响GLUTI和GLUT3基因的表达;而细胞因子mIL一la(10ng/mL),mTNF一Q(1 0 ng/mL)和mIFN一Y(500U/mL)单独或共同作用于细胞,都能够显著降低成年大鼠Leydig细胞中hCG诱导的GLUTS基因mRNA水平(P(0,001)。 本文还成功地在撇一10小鼠Leydig肿瘤细胞中过量表达IP一10基因。实验结果证实,转染的IP一10基因在袱一10细胞中的过量表达可显著抑制c胡P(0.Zlnlnol/L)诱导的孕酮生成(P<0 .01),其抑制作用可能是通过减少类固醇合成急性调节蛋白StAR(DI)基因的表达而实现;JH-Thymidine掺入DNA实验数据表明,转染的IP一10基因在MA一10细胞中过量表达能够显著抑制细胞的增殖(P<0 .01),说明IP一10蛋白对肿瘤细胞的生长具有调节抑制作用,提示了IP一10基因转染法在前列腺癌等疾病基因治疗中的潜在用途,而其抑制细胞增殖的机理还需进一步探讨。
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