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目的:探究瑞香素对卵巢癌的抑制作用及其对卵巢癌细胞的增殖、凋亡的作用并进一步探索其具体作用机制。方法:1.采用CCK8方法分别检测卵巢癌细胞(A2780、OVCAR8、SKOV3)经瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)处理24h及48h后的细胞活力和增殖能力。2.采用Annexin V/PI双染色法流式细胞术检测A2780细胞经瑞香素不同浓度(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用24h后的凋亡率。3.采用Western-blot法检测A2780细胞经瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用24h后凋亡相关蛋白(caspase3、Bax、PARP)及抗凋亡蛋白(Bcl2)的表达水平。4.采用Hochest33342及PI双染色后荧光显微镜下观察A2780细胞经瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用24h后凋亡细胞变化。5.采用ROS检测试剂检测A2780细胞经瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用后ROS产生情况。6.在ROS抑制剂NAC存在情况下,分别采用ROS检测试剂、CCK8、Annexin V/PI双染色法流式细胞术及Western-blot法检测A2780细胞经瑞香素作用后ROS水平、细胞活力、凋亡率及凋亡蛋白表达水平的变化。7.采用Western-blot法检测A2780细胞经瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用24h后的Nrf2表达水平的变化。结果:1.CCK8结果显示:不同浓度瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于OVCAR8细胞24h后细胞的活力分别为97±1.98%、87±3.59%、72±4.14%、58±1.29%,5ug/ml组和对照组差异无统计学意义(P>0.05),余组间各浓度差异均具有统计学意义(P<0.05),作用48h后OVCAR8的细胞活力分别为83±5.66%、75±2.36%、60±2.74%、46±0.59%,不同浓度瑞香素组间均具有统计学差异(P<0.05)。瑞香素作用于OVCAR8 24h和48h的IC50值分别为49.46ug/ml、32.57ug/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。同上,不同浓度瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于SKOV3细胞24h后细胞的活力分别为87±7.1%、78±4.6%、69±1.0%、60±0.97%,不同浓度瑞香素组间均具有统计学差异(P<0.05),作用48h后SKOV3的细胞活力分别为74±2.1%、71±0.39%、56±0.55%、42±0.36%,不同浓度瑞香素组间均具有统计学差异(P<0.05)。瑞香素作用于SKOV3 24h和48h的IC50值分别为70.98ug/ml、27.70ug/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于A2780细胞24h后细胞的活力分别为88±2.6%、88±2.5%、62±0.41%、44±0.26%,5ug/ml组和10ug/ml组差异无统计学意义(P>0.05),余不同浓度瑞香素组间均具有统计学差异(P<0.05),作用48h后A2780的细胞活力分别为74±1.4%、70±1.4%、52±4.9%、36±3.1%,不同浓度瑞香素组间均具有统计学差异(P<0.05)。瑞香素作用于A2780 24h和48h的IC50值分别为32.46ug/ml、21.51ug/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于正常卵巢细胞(IOSE8C)24h后细胞的活力分别为96±2.07%、93±3.42%、93±1.17%、95±0.88%,各浓度与对照组差异均无统计学意义(P>0.05),作用48h后IOSE8C的细胞活力分别为99±1.41%、94±1.62%、96±0.81%、95±2.21%,各浓度与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。2.Hochest33342及PI双染色后荧光显微镜下观察显示,A2780细胞经不同浓度的瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)处理24h后,与对照组比较,各浓度凋亡细胞即Hochest阳性细胞(亮蓝色)和PI阳性细胞(红色)明显增多,且凋亡细胞随瑞香素浓度增加逐渐增多。Annexin V/PI双染色法流式细胞术结果显示:不同浓度下瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用卵巢癌细胞A2780细胞24h后,凋亡率分别为14±1.3%、27±1.1%、34±0.95%,对照组凋亡率为6.7±0.67%,组间两两比较,均具有统计学差异(P<0.05)。3.Western-blot结果显示:不同浓度瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于卵巢癌细胞A2780,培养24h后,促凋亡蛋白Caspase3、PARP、Bax的表达量随着浓度的增加逐渐升高,各浓度与空白对照组相比,差异具有统计学意义的(P<0.05)。4.ROS检测结果显示:A2780细胞经各浓度瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)处理后,与对照组相比ROS(绿色荧光)水平随瑞香素浓度增加而逐渐增多。5.CCK8结果显示:设实验组为在NAC存在下,不同浓度的瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于A2780细胞24h,细胞活力分别为97±6.65%、96±3.35%、77±2.2%、71±2.78%,对照组为不同浓度瑞香素(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)单独作用24h,细胞活力分别为84±1.04%、81±3.95%、64±3.60%、54±2.53%,瑞香素浓度相同的实验组与对照组相比较,均具有统计学差异(P<0.05)。实验组与对照组的IC50分别为82.22ug/ml、48.22ug/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.Annexin V/PI双染色法流式细胞术结果显示:在NAC存在下,瑞香素(40ug/ml)作用于A2780细胞24h后凋亡率为26±0.92%,与对照组同等浓度的瑞香素单独作用24h后凋亡率35±0.71%相比较,具有统计学差异(P<0.05)。Western-blot结果显示:在NAC存在下,瑞香素(20,40ug/ml)作用A2780细胞24h后细胞内凋亡蛋白Caspase-3的表达量与同等浓度的瑞香素单独作用相比较明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。7.Western-blot结果显示:不同浓度瑞香素(10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于卵巢癌细胞A2780,培养24h后,细胞内Nrf2的表达量随着药物浓度的增加逐渐减少,各浓度与空白对照组相比,差异具有统计学意义的(P<0.05)。结论:1.瑞香素抑制卵巢癌细胞活力及增殖能力,促进其凋亡。2.瑞香素诱导卵巢癌细胞内ROS产生。3.瑞香素可能是通过抑制Nrf2表达并诱导ROS产生发挥抗卵巢癌作用。