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猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV),为杯状病毒科杯状病毒属中成员,是一种单股正链RNA病毒。病毒无囊膜,直径35-39nm。FCV能够引起猫和猫科动物口腔及上呼吸道疾病。该病是一种多发型、流行性、具有高度传染性的传染病,临床上称为猫传染性-鼻结膜炎。患病的动物表现为发烧、鼻炎、口炎、眼分泌物增多,单独的FCV感染常不引起致命性疾病,和其他病原混合感染时,可表现跛行、肺炎、胃肠炎、肾炎等,严重时导致动物的死亡。该病不仅危害家养的猫和圈养的猫科动物,还严重威胁野生猫科动物。疫苗接种是对该病的最好预防措施,但并不能完全清除病原,使患病动物成隐形带毒者,持续向外界环境中排毒,成为传染源。此外,由于FCV的易变性,也降低了疫苗的免疫保护作用。由于FCV极其容易变异及该病临床症状的多样性,给该病毒和该病的检测和诊断带来了一定的困难。病毒的分离培养、电镜观察、RT-PCR、荧光定量PCR、中和实验、琼脂扩散实验都能检测该病毒。这些方法需要熟练的实验室操作技能。血清学方法既可以评价疫苗的免疫保护效果,也有助于疾病的诊断,但是,目前国内尚无商品化血清学检测试剂盒。所以,开展血清学诊断方法的研究对疾病的预防、控制十分必要。FCV具有3个开放阅读框(ORF),其中,ORF2编码能够诱导机体产生有效抗体的衣壳蛋白,包含多个抗原识别位点。本研究根据本实验室保存的1株豹源猫杯状病毒基因序列设计一对引物,扩增了ORF2中1 734 bp的核苷酸序列,将其克隆至表达载体pET-28a上,成功构建了pET-28a-FCV1 734重组质粒。将该质粒转化至大肠杆菌表达菌株中,诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测,证明所表达的蛋白具有良好的反应原性。纯化提取该蛋白,作为猫杯状病毒间接ELISA方法的包被抗原。利用方阵法,确定酶标二抗的的最佳工作浓度为1:5 000,抗原最佳包被浓度为2.1250μg/mL,一抗最佳稀释度为1:200。优化最佳反应条件,确定了阴、阳性血清的临界值:当OD490值大于0.2570判定为阳性,小于0.2390判定为阴性,介于0.2570-0.2390之间的判定为疑似。利用本研究建立的猫杯状病毒间接ELISA方法对采自吉林省49份、上海188份和广西47份猫血清进行检测,结果表明,来源于吉林省猫血清阳性率69.39%(34/49),上海地区猫血清阳性率91.49%(172/188),广西省猫血清阳性率89.71%(38/47),血总阳性率85.92%(244/288)。