论文部分内容阅读
蛇胆为常用名贵中药,具有清热解毒、化痰镇痉之功效,用于痰热惊厥及风热哮喘,是蛇胆川贝液、蛇胆陈皮散、片仔癀等常用中药制剂的主要原料。胆汁酸是蛇胆的主要有效成分,其含量与其种属、产地、采收季节、甚至处死时候的饥饿程度都有一定的关系。由于蛇胆药材来源复杂,价格昂贵,缺乏国家标准,其质量尚未得到良好的控制,目前市场上常见鸡、鸭、猪、牛、羊等动物的胆汁掺杂蛇胆汁一起入药,大大降低了蛇胆的疗效。胆汁酸为蛇胆的主要活性成分,但由于蛇胆中除牛磺胆酸外,其余胆汁酸成分含量较低,且胆汁酸成分紫外吸收较弱,常规的检测手段,如薄层色谱(TLC),液相-紫外检测(HPLC-UV),液相-蒸发光检测(HPLC-ELSD)等技术无法全面地对蛇胆中胆汁酸成分进行定性定量分析。因此,蛇胆的胆汁酸成分及其分析方法的研究对于蛇胆药材的质量控制具有非常重要的意义。本文采用Waters Xevo UPLC-ESI-Qtof-MS/MS,基于16种对照品的裂解规律,鉴定出蛇胆中15种胆汁酸成分,包括4对同分异构体,且首次提出三种新的胆汁酸结构;采用Waters TQD UPLC-QqQ-ESI-MS/MS对蛇胆中市场上常见的猪、牛、羊、鸡、鸭等掺伪胆汁进行控制,找到蛇胆和各掺伪胆汁之间的特征性成分,并对其进行限量控制;运用硅胶、凝胶和半制备HPLC等多种色谱分离技术对蛇胆中胆汁酸成分进行分离,通过MS、NMR等波谱技术对化合物进行结构鉴定,共分离鉴定了5个化合物,包括两个新化合物;采用ABSciex 4500UPLC-QqQ-ESI-MS/MS对来源于3个科(游蛇科,眼镜蛇科,蝰科)17种动物61个蛇胆中胆汁酸成分进行了定量分析,在13min内同时测定了蛇胆中的7种化合物,包括牛磺胆酸(TCA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、胆酸(CA)、3α,12α-二羟基-7-羰基-5β-胆甾烷-24-牛磺酸(T1)和3α,7α,12α,23R-四羟基-5β-胆甾烷-24-牛磺酸(T2),其中T1和T2为首次在蛇胆中进行定量检测。本论文运用结合了超高效液相的良好分离效果和质谱的高灵敏度的液质联用技术,对中药蛇胆及其掺伪猪牛羊鸡鸭胆的胆汁酸成分进行了全面的定性和定量分析,较深入系统地阐明了蛇胆中胆汁酸成分的组成,为蛇胆药材的质量控制及混伪品的鉴定提供了重要依据。