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血管重构是高血压靶器官损害的表现，是高血压维持和恶化的结构基础，主要病理过程是血管平滑肌细胞（VSMC）异常增殖。研究发现持续缓慢上升的细胞内钙离子浓度是细胞增殖的关键。经典瞬时受体电位通道（TRPC）是近年发现的通道蛋白，参与了VSMC膜上钙池操纵性钙通道（SOCC）和受体操纵性钙通道（ROCC）的组成，在调节细胞内钙稳态发挥重要作用。目前高血压血管重构研究主要集中在胸/腹主动脉和肠系膜动脉，对颈动脉的研究较少。在高血压的进程中，尤其在颈动脉重构时，TRPC蛋白如何表达?抑制TRPC通道能否改善颈动脉重构，目前尚不清楚。本研究将动态研究SHR颈动脉重构和体外培养的SHR颈动脉来源VSMC增殖时TRPC和下游信号活化的T细胞核因子3（NFATc3）的表达情况，探讨TRPC通道蛋白在颈动脉重构中的意义；并采用人参皂甙Rb1进行干预，研究其对颈动脉重构和培养的VSMC增殖时TRPC和下游信号NFATc3表达及细胞内钙离子浓度变化的影响，探讨人参皂甙Rb1改善颈动脉重构的机制。对今后高血压及其血管重构提供新的理论和治疗靶点，从而在今后高血压及其血管重构的防治具有重要意义。第一部分TRPC在自发性高血压大鼠（SHR）颈动脉的表达目的：研究TRPC在不同周龄SHR颈动脉的表达，探讨TRPC通道蛋白在高血压颈动脉重构中的作用。方法：30只雄性SHR随机分为4周龄、8周龄、18周龄组（n=10），周龄匹配雄性WKY大鼠为对照组。（1）每两周测尾动脉收缩压；（2）颈动脉组织染色测颈动脉壁厚（MT）、腔径（LD）、中膜面积（MA）、胶原面积和中膜细胞核面积；（3）TRPC通道激动剂和阻滞剂干预测定颈动脉环功能；（4）Real-time PCR和Westernblot测颈动脉TRPC各亚型mRNA转录及蛋白表达。结果：（1）随SHR周龄增加，SBP升高，MT、LD、MT/LD、MA、胶原面积和中膜细胞核面积逐渐增加，在18周龄时变化明显。（2）给TRPC激动剂去甲肾上腺素（NE），18周龄SHR颈动脉环收缩明显增强；应用选择性TRPC通道阻滞剂SKF96365，18周龄SHR颈动脉环收缩抑制率最高；从功能上显示颈动脉重构时TRPC表达增强。（3）随SHR周龄增加、SBP升高,颈动脉的TRPC1、3、6mRNA转录与蛋白表达逐渐上调；TRPC4、5表达无明显变化； TRPC7表达量极少；18周龄时，仅TRPC1、6表达明显升高，与WKY比较有明显差异。结论：（1）SHR颈动脉重构随周龄增加、血压升高而加重；（2）TRPC1和TRPC6与SHR颈动脉重构的发生与发展相关。第二部分培养SHR颈动脉来源的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和TRPC表达变化目的：研究培养的VSMC增殖时TRPC1、TRPC6和下游信号分子NFATc3的表达和胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化，探讨TRPC在高血压颈动脉VSMC增殖中的作用。方法：取13-14周龄雄性SHR的VSMC培养,以含和不含AngⅡ（10-7M）的VSMC作为实验组和对照组。（1）WST-1和BrdU ELISA法测定细胞增殖；（2）Rear-time PCR及Western blot测定VSMC中TRPC1、TRPC6和NFATc3mRNA转录及蛋白表达水平；（3）共聚焦测[Ca2+]i。结果：（1）实验组VSMC的WST-1代谢活性和BrdU掺入DNA合成明显升高，提示实验组细胞增殖水平升高；（2）实验组VSMC的TRPC1、TRPC6和NFATc3mRNA转录和蛋白表达水平明显增高；（3）实验组VSMC[Ca2+]i较对照组升高。结论：（1）增殖的VSMC，TRPC1、TRPC6和NFATc3表达增加，[Ca2+]i升高；（2）AngⅡ可能通过促进TRPC表达增加，升高[Ca2+]i，导致细胞的增殖。第三部分人参皂甙Rb1对VSMC增殖及其TRPC表达的影响目的：研究人参皂甙Rb1对VSMC增殖及其TRPC1、TRPC6、NFATc3的表达和[Ca2+]i的影响，探讨人参皂甙Rb1在VSMC增殖中的作用。方法：培养的VSMC，加AngⅡ及10-5M、10-6M、10-7M、10-8M浓度的人参皂甙Rb1干预作为实验组，以L-VDCC阻滞剂-氨氯地平、AngⅡ受体拮抗剂-替米沙坦和选择性TRPC通道阻滞剂-SKF96365干预为对照组，并设不含AngⅡ的SHR和WKY颈动脉VSMC作为空白对照组。（1）WST-1和BrdU ELISA法测定细胞增殖；（2） Rear-time PCR、Western blot测定VSMC中TRPC1、TRPC6和NFATc3以及L型电压依赖性钙通道（L-VDCC）蛋白α1c（L-CPα1c） mRNA转录和蛋白表达；（3）共聚焦测VSMC的[Ca2+]i。结果：（1）人参皂甙Rb1（10-7M）、替米沙坦和SKF96365显著降低经AngⅡ处理VSMC的WST-1代谢活性和BrdU掺入DNA合成，减少TRPC1、TRPC6和NFATc3mRNA转录、蛋白表达，降低[Ca2+]i；（2）氨氯地平降低AngⅡ处理的VSMCL-CPα1c mRNA转录和蛋白表达水平，但对TRPC1、TRPC6表达及[Ca2+]i无明显影响。结论：（1）人参皂甙Rb1、替米沙坦可抑制VSMC增殖；其机制可能与人参皂甙Rb1、替米沙坦下调VSMC的TRPC1、TRPC6和NFATc3表达而导致[Ca2+]i下降有关；（2）氨氯地平对VSMC的TRPC表达和细胞增殖无明显影响。第四部分人参皂甙Rb1对SHR颈动脉重构的影响目的：研究人参皂甙Rb1对高血压颈动脉重构及其TRPC1、TRPC6、NFATc3和L-CPα1c表达的影响，探讨人参皂甙Rb1在高血压颈动脉重构中的作用。方法：40只8周龄SHR雄性大鼠，随机分4组（每组n=10），（1）SHR对照组（S），蒸馏水2ml/d灌胃；（2）氨氯地平（A）治疗组，给苯磺酸氨氯地平10mg/kg.d灌胃；（3）替米沙坦（T）治疗组,给替米沙坦8mg/kg.d灌胃；（4）人参皂甙Rb1（R）治疗组,给人参皂甙Rb15mg/kg.d腹腔注射；另设周龄、性别匹配的WKY大鼠作为对照组（W，n=10），蒸馏水2ml/d灌胃；干预10周。每2周测SBP。实验结束时（1）腹主动脉采血，放射免疫法测血浆AngⅡ；（2）颈动脉组织切片，VEG染色测颈动脉MT、LD、MA及胶原面积；HE染色测定中膜细胞核面积；（3） Rear-time PCR、Westernblot测定颈动脉组织中TRPC1、TRPC6和NFATc3，以及L-CPα1c mRNA转录及蛋白表达水平。结果：（1）R组血压较S组明显下降，但仍高于A组和T组；（2）R组和T组的血浆AngⅡ水平分别低于和高于S组，而A组无变化；（3）R组和T组的MT、MT/LD、MA、VSMC平均核面积及胶原面积明显低于S组，而A组无明显变化；（4）R组和T组颈动脉的TRPC1、TRPC6、NFATc3mRNA转录与蛋白表达低于S组；R组和A组颈动脉的L-CPα1c mRNA转录与蛋白表达降低；三组颈动脉的NFATc3mRNA转录与蛋白表达均有下降。结论：（1）人参皂甙Rb1可降低血压和血浆AngⅡ水平，减轻SHR颈动脉重构；（2）替米沙坦不仅可以降压，还能减轻SHR颈动脉重构；（3）氨氯地平虽然能降压，但不减轻颈动脉重构；（4）人参皂甙Rb1和替米沙坦可能通过下调TRPC表达，降低血浆AngⅡ水平，减轻SHR颈动脉重构；而氨氯地平没有此作用。因此，TRPC在高血压颈动脉重构中起重要作用。