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2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradio,2-ME)是一种甾体激素类化合物,属新型激素类抗肿瘤药物,为17β-雌二醇的内源性代谢产物。自20世纪90年代以来,大量体内外研究表明,2-ME具有抗增殖、抗细胞凋亡、抗血管生成等多重作用,证实了它在肿瘤治疗中的价值。体内试验中,对于恶性肉瘤、乳腺癌、多发性骨髓瘤、前列腺癌、宫颈癌、黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、恶性内皮细胞瘤及造血系统肿瘤白血病等显示出抗肿瘤生长和抗血管新生的作用。临床前动物肿瘤模型实验显示2-ME在治疗剂量下具有毒性低、耐受性好的优点。虽然2-ME的抗肿瘤作用机制并未完全阐明,但是临床实验和动物模型研究证明,其抗肿瘤作用并不依赖于雌性激素受体,而与破坏微管和抑制HIF, VEGF等细胞因子的表达有关。和其他甾体激素一样,2-ME在水中的溶解度小,血药浓度低。本研究考察了2-ME脂质体(2-methoxyestradiol liposome,2-ME-L)对于S18o腹水瘤、H22肝癌实体瘤和食管癌细胞EC9706移植瘤的抗肿瘤作用,并初步探讨了其抗肿瘤机理。本文的主要研究内容摘要如下：1.2-ME-L对S180腹水瘤药效学研究。考察了2-ME-L抑制腹水形成,控制腹水恶化和抑制腹水引起腹腔转移癌的作用,并通过细胞周期和凋亡率的检测初步探讨2-ME影响腹水细胞周期变化和诱导细胞凋亡的作用。首先成功建立了S180腹水瘤模型,将荷瘤鼠随机分为6组,每组20只,雌雄各半,空白脂质体0.2ml·d-1为阴性对照组,5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU) 20mg·kg-1·d-1为阳性对照组,2-ME溶液组(2-ME Solution,2-ME-S): 22.5mg·kg-1·d-1;2-ME-L高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)剂量组。分组24h后连续腹腔给药7d,每2d测量腹围,观察荷瘤鼠行为体征,7d后每组随机抽取半数荷瘤小鼠,颈椎脱臼处死,解剖观察腹腔中主要脏器,称重,取出肝脏用中性甲醛固定,常规切片进行病理检查,收集腹水,测量体积,计算细胞存活率,流式细胞术检测2-ME-L对于癌细胞周期和凋亡的影响。剩余小鼠统计生存时间,计算生命延长率。研究结果显示2-ME-L各浓度组小鼠能够明显延长S180荷瘤小鼠的生存时间,治疗组腹水量降低,腹水中癌细胞、数存活率下降,细胞凋亡率升高,病理切片结果显示癌细胞较少在腹腔内转移,抑瘤作用显示出明显的剂量依赖性,2-ME-L将S180腹水瘤细胞阻滞在G2／M期,从而导致细胞的凋亡,2-ME的抗肿瘤作用可能与2-ME对细胞周期影响有关。将同等剂量的2-ME-L与2-ME-S的抗肿瘤作用进行对比可得,2-ME-L的抑瘤作用更显著,在治疗中并未出现明显的毒性反应,而生命延长率,肝脏指数等结果显示,2-ME-S对实验动物具有较大毒副作用。2.2-ME-L对H22肝细胞癌实体瘤的抑制作用研究。考察了2-ME对于肿瘤细胞的增殖抑制作用和对肿瘤组织内部血管生成抑制作用。皮下注射肿瘤细胞建立H22肝癌实体瘤模型,将荷瘤鼠分为6组,每组10只,雌雄各半,分别为：H22实体瘤模型组：生理盐水0.2ml·d-1；阴性对照组：空白脂质体0.2ml·d-1；阳性对照组：5-氟尿嘧啶(5-FU) 20mg-kg-1·d-1; 2-ME脂质体高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)剂量组。分组24h后尾静脉注射给药,连续7d。给药期间每2d测量腹围,观察荷瘤鼠行为体征,给药结束后24h将小鼠全部处死,先测量肿瘤体积,然后完整剥离肿瘤组织,立即称重。最后分别计算各组肿瘤体积抑制率(VIR)和肿瘤重量抑制率(WIR)。瘤组织经4%中性甲醛固定后,常规脱水、石蜡包埋,4μm切片,苏木素—伊红染色,普通光学显微镜下观察组织病理变化。免疫组化染色检测肿瘤内部VEGF、Ki-67和CD34的表达。研究结果表明2-ME-L能够抑制肿瘤的生长,抑制肿瘤细胞的增殖,并能够抑制肿瘤组织内部新生血管的生成,并显示出明显的剂量依赖性,2-ME-L可抑制肿瘤组织内细胞增殖因子的表达,其抗肿瘤作用可能与癌细胞的增殖阻滞作用有关；2-ME-L可减少肿瘤细胞内部微血管密度,降低血管内皮生长因子的表达,其抗肿瘤作用可能与体内的抑制血管新生作用相关。阴性对照组和模型组各项指标统计结果没有显著性差异,推测空白脂质体没有治疗作用。3.2-ME-L对食管癌细胞EC9706裸鼠移植瘤的抑制作用,并初步探讨其抗食管癌移植瘤的作用机制。将食管癌细胞EC9706的单细胞悬液注射入BALB/c裸小鼠的右背侧腋部皮下,注射约两周后皮下实体瘤形成,将荷瘤鼠随机分为5组,每组3只,分别为空白脂质体0.2ml·d-1；阳性对照组：5-氟尿嘧啶(5-FU)20mg·kg-1·d-1;2-ME脂质体高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)剂量组。分组24h后尾静脉注射给药治疗,连续7d。给药期间每2d测量腹围,观察荷瘤鼠行为体征,给药结束后24h将小鼠全部处死,先测量肿瘤体积,然后完整剥离肿瘤组织,立即称重。最后分别计算各组肿瘤体积抑制率(VIR)和肿瘤重量抑制率(WIR)。瘤组织经4%中性甲醛固定后,常规脱水、石蜡包埋,4μm切片,伊红—苏木素染色,普通光学显微镜下观察组织病理变化。免疫组化染色的方法检测肿瘤组织内部VEGF,EGF,Ki-67和HIF-1a的表达情况,使用TUNEL法检测肿瘤组织内部细胞凋亡的情况,并对结果做出统计分析。结果显示,2-ME-L可显著抑制实体瘤的生长,并导致肿瘤内部组织出现不同程度的坏死区,抑瘤作用具有明显的剂量依赖性；通过免疫组化检测结果可推测2-ME-L能够抑制肿瘤组织内皮细胞的增生,抑制癌细胞的增殖,抑制血管的新生；2-ME-L能够诱导实体瘤内部细胞的凋亡,其作用机制可能与抑制肿瘤组织内皮细胞的增生,抑制癌细胞的增殖,抑制血管的新生有关。