长春花因其生物碱是目前应用最广的天然植物抗肿瘤药物，成为近年来生物制药领域的热点，并被确定为研究植物次生代谢的模式植物。有报道表明TDC酶是长春花生物碱代谢途径的一个限速酶；改变植物培养细胞的外界因子能有效地刺激生物碱的合成。本文从长春花愈伤组织的诱导出发，通过筛选高产细胞，测定长春花及其组织培养物中生物碱代谢途径TDC、POD的活性，并就外界因子对R40细胞的酶活性、生物碱积累的关系，生物碱的HPLC测定和纯化进行了探讨，研究结果如下： 1．通过对长春花脱分化的条件进行探讨，发现单独使用2.4-D能得到愈伤组织，单独使用NAA诱导率不高，同时使用用2.4-D 2.0mg／L+6-BA 0.5mg／L的效果最佳，6-BA对愈伤组织的诱导有一定的促进作用。通过对紫外照射后的愈伤组织进行筛选，得到的R40细胞保持较高的增长量。 2．组织分化对TDC的活性影响不大，TDC的活性与色胺的含量正相关；POD的活性可能与组织分化有一定关系，生物碱在长春花各器官中的分布不一，与POD关系较大。 3．光照可以促进长春花组织培养物中的TDC、酸性POD活性的提高；在培养基中加入渗透调节剂如Na⁺、K⁺、PVP可以提高悬浮细胞中TDC、酸性POD、碱性POD的活性；改变外界因子，如光照、渗透调节剂如Na⁺、K⁺、PVP的加入促进组织培养物中生物碱的积累。 4．在长春花生物碱的HPLC分析中，以A相：水(含0.005mol·L^-1磷酸氢铵)，B相：甲醇（含0.67％三乙胺）和C相：乙腈作流动相，采用非线性梯度A:B:C（0min／46:34:20，10min／20:52:28，32min／15:45:45，34min／10:34:20，40min／46:34:20）时可准确、方便地测定文多灵、色胺、长春碱、长春质碱的含量。 5．以70％甲醇溶剂，后经酸化、碱沉淀和有机溶剂萃取相结合的方法提取长春花总生物碱，取得了较好的效果。通过筛选确定732阳离子交换树脂对生物碱有着良好的吸附性能且易于再生，对长春花生物碱粗提物进行纯化后经HPLC检测发现，保留时间＜10min绝大部分被除去，应用732阳离子交换树脂对生物碱有很好的纯化作用。 根据上述实验结果，表明2.4-D对长春花组织细胞的脱分化起了关键作用，添加6-BA能促进脱分化进程；筛选得到的R40细胞具有优良的性能；生物碱在