梨是我国的重要水果之一,属于蔷薇科（Rosaceae）梨属（Pyrus L.）多年生落叶木本果树。梨矮化密植栽培模具有早果、丰产、优质、省力化管理等诸多优点,矮化砧木的育种和矮化机理的研究为实现梨矮化栽培奠定基础。基于转基因技术的育种和基因功能研究已成为一种重要的手段,对于缩短育种周期和创制目标种质具有重要的作用。鉴于此,本研究对梨叶片和愈伤组织遗传转化的方法进行了研究。同时,在前人的基础上,利用转基因技术,解析梨赤霉素氧化酶GA2ox8基因的矮化功能。主要研究结果如下:1. 梨叶片和愈伤遗传转化体系优化。为提高农杆菌介导的梨叶片瞬时转化效率,利用单因素试验的方法,研究了遗传转化过程中农杆菌接种方式、侵染液碳源和p H对叶片瞬时转化效率的影响。结果表明,与‘康佛伦斯’和‘OHF 333’两种材料相比,‘山梨’叶片在以10μL白枪头接种的情况下,蓝斑个数最多;当转基因侵染液的p H值由4.5逐渐增大时,叶片瞬时转化效率呈上升趋势,直到p H为5.5时达到最大,之后呈下降趋势,而侵染液中不同的葡萄糖和蔗糖组合对瞬时转化效率并无显著影响。此外,‘OHF 333’叶片在含有80 mg/L新霉素或5 mg/L卡那霉素的再生培养基中愈伤无法正常生长。为建立愈伤的遗传转化体系,首先筛选了‘红星’愈伤继代培养基中生长素和细胞分裂素的浓度,其细胞分裂素6-BA最适浓度为0.5 mg/L,生长素2,4-D的最适浓度为1.0 mg/L或1.5mg/L,其次筛选了不同浓度的卡那霉素和潮霉素对愈伤生长的影响,结果表明,当培养基中分别含有25 mg/L卡那霉素或2.5 mg/L潮霉素,愈伤无法正常生长。2. PbGA2ox8基因的矮化功能分析。利用NCBI数据库,搜索得到白梨GA2ox8序列。从‘红早酥’梨幼嫩叶片中克隆该基因,构建过表达载体。氨基酸序列分析结果显示,PbGA2ox8蛋白具有GA2ox家族的保守结构域DIOX＿N和2OG-Fell＿Oxy,与拟南芥和水稻的GA2ox蛋白的结构域相似。系统进化分析结果表明,PbGA2ox8与拟南芥和水稻中的C₂₀-GA2ox基因具有较高的同源性,其中与At GA2ox8和At GA2ox7位于同一个进化枝上。烟草叶片和洋葱表皮亚细胞定位结果表明,PbGA2ox8基因编码的蛋白定位于细胞核和细胞质。此外,与野生型对照相比,过表达PbGA2ox8基因的转基因烟草株系呈现株高矮小,节间极度短缩,叶片长度和宽度减小。