论文部分内容阅读
蓖麻毒素是一种植物蛋白，具有极强的细胞毒性，是一种对公共安全存在潜在威胁的生物恐怖毒剂，因此，发展和建立其特异、灵敏的检测方法十分重要。胶体金免疫层析检测法作为一种蓖麻毒素检测方法，其检测特异性强、高效、灵敏，结果的判定只需肉眼或简单的光学仪器。本文研究并优化了免疫层析检测用胶体金的制备方法，建立了特异性强、灵敏度高的定性检测蓖麻毒素的胶体金免疫层析方法。 免疫层析检测用胶体金要求粒径在20~40nm左右、粒径分布窄，因此对胶体金制备工艺进行考察和优化。本实验选择了柠檬酸钠（Na3C6H5O7）和抗坏血酸（AA）两种还原剂，以胶体金的粒径及其分布为主要指标，在单因素研究的基础上，采用 Box-Behnken响应面优化制备工艺，结果如下： （1）柠檬酸钠法：Na3C6H5O7/HAuCl4体积比为1.6，100℃下200r/min搅拌6min。制得的胶体金颗粒多为球形，粒径在24nm左右，单分散性好，溶液4℃稳定性佳。 （2）抗坏血酸法：AA/HAuCl4摩尔比为1，pH为11，20℃下反应2h。所得胶体金颗粒多为球形，粒径在45nm左右，单分散性较好，溶液4℃稳定性较佳。比较两种制备方法，选择胶体金的粒径分布更窄、稳定性更好的柠檬酸钠法。 通过盐析、亲和层析、凝胶过滤等方法提取并纯化得到蓖麻毒素和相思子毒素，用于蓖麻毒素胶体金免疫层析试纸的性能评价。对纯化后的蓖麻毒素和相思子毒素进行血细胞凝集实验，结果表明两者均有较高的凝集活性。 对胶体金的最佳抗体标记量进行了优化，利用间接 ELISA法考察了金标抗体的活性。在此基础上建立了双抗体夹心的胶体金免疫层析试纸用于检测蓖麻毒素，该试纸检测限为1μg/mL，与牛血清白蛋白、相思子毒素无交叉反应，模拟样本的检测结果可靠，可用于蓖麻毒素的快速定性检测。