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研究背景：胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-related protein 1, IGFBPrP1)是近年来发现的一种可溶性分泌蛋白,导师刘立新已有的研究发现：在肝纤维化、肝硬化患者肝组织中IGFBPrP1的表达较正常对照组明显增强[’]；在体外培养的肝星状细胞(hepatocyte stellate cell, HSC)中加入IGFBPrP1可使其合成细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增多；用抗IGFBPrP1抗体可逆转由TGFβ1诱导的HSC产生的过多的Ⅰ型胶原(CollagenⅠ);抗IGFBPrP1抗体可通过抑制肝纤维化小鼠HSC的活化、减少ECM的主要成分CollagenⅠ与纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的合成及减少肝细胞的凋亡等途径发挥抗纤维化作用。以上研究结果表明IGFBPrP1可能是肝纤维化发生机制中新的致病因子。那么,IGFBPrP1是否对肝脏具有直接的致纤维化作用呢?其作用机制为何?目前尚无研究报道。为了阐明此问题,设计了本课题。目的：明确外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对在体肝组织的影响,并探讨其可能的机制。方法：24只雄性C57BL／6野生型小鼠随机分为3组：正常对照组(8只),腹腔注射等量磷酸盐缓冲液；rmIGFBPrP1 2周组(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持续2周；rmIGFBPrP1 4周组(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持续4周。分别在第2周、4周末处死小鼠。(1)取肝组织,肉眼观察肝组织大体形态；(2)分别对肝组织石蜡切片做HE染色和苦味酸-天狼猩红染色观察肝组织病理变化及胶原纤维形成情况；(3)免疫组织化学染色检测肝组织中Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1, TGFβ1)、Smad3及p-Smad2/3的表达；(4)Western blot检测肝组织中IGFBPrP1、纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的相对表达量,并进行IGFBPrP1与其他各指标的相关性分析。结果：(1)苦味酸-天狼猩红染色分析结果：肝组织中胶原含量在rmIGFBPrP1 2周组较正常对照组明显增多,rmIGFBPrP1 4周组较2周组明显增多(0.45%±0.15% vs 0.21%±0.11%,1.02%±0.33% vs 0.45%±0.15%,P<0.05)。(2)免疫组织化学染色结果显示：rmIGFBPrP1 2周组及4周组肝组织中CollagenⅢ、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表达均较正常对照组显著增强,且4周组上述蛋白表达量较2周组高(CollagenⅢ:F=221.858, P<0.01; TGFβ1:F=280.571, P<0.01; Smad3: F=292.114, P<0.01; p-Smad2/3:F=114.251, P<0.01)。(3) Western blot检测结果显示：rmIGFBPrP1 2周组及4周组肝组织中IGFBPrP1、CollagenⅠ、FN、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表达均较正常对照组显著增强,且4周组强于2周组(F=20.136、F=6.029、F=17.282、F=7.484、F=20.957、F=87.713,P<0.01)。肝组织中IGFBPrP1的表达变化与FN (r=0.890, P<0.01)、CollagenⅠ(r=0.921,P<0.01)、TGFβ1 (r=0.726, P<0.01)、Smad3 (r=0.977, P<0.01)及p-Smad2/3 (r=0.809, P<0.01)的表达变化呈正相关。结论：(1)外源性IGFBPrP1可通过增加细胞外基质的主要成分CollagenⅠ,Ⅲ及FN的含量,导致肝组织中ECM过度沉积,对肝脏有直接的致纤维化作用。(2)外源性IGFBPrP1对肝脏的致纤维化作用是通过TGFβ1/Smad3信号通路来实现的。