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目的:T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)为基因突变引起T淋巴细胞恶性转化所致的一种造血系统恶性肿瘤性疾病,该病在儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中约占15%,在成人ALL中约占25%,近年来T-ALL发病率有增高趋势。一直以来,T-ALL预后较差,易早期复发,且复发后很难单纯通过化疗再次达到完全缓解,一直被列为中、高危组给予强效化疗方案,寻找新的治疗手段非常必要。我们的目标是通过靶向治疗根治白血病,发现特异高效的T-ALL治疗靶点,是目前的研究热点。研究方法:1、收集成人及儿童T-ALL患者的骨髓单个核细胞样本,包括初诊(n=46)、首次化疗达完全缓解(complete remission,CR)(n=23)和复发(n=6)的T-ALL患者。以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测骨髓单个核细胞中的L型细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白(cellular Fas-associated death domain-like interleukin-1βconverting enzyme inhibitory protein,c-FLIP)的mRNA表达情况。应用流式细胞术使用单克隆抗体对所收集的病例进行免疫分型检测,Real-time PCR方法检测患者融合基因,应用24小时培养法+直接法进行患者骨髓染色体检测。分析c-FLIP_L基因的表达与T-ALL患者的临床特征及首次治疗疗效的关系。2、Western blot方法检测T-ALL患者的骨髓单个核细胞、Jurkat和HUT-78细胞株的组蛋白去乙酰化酶表达情况。Western blot方法检测西达本胺作用后,Jurkat和HUT-78细胞株的组蛋白去乙酰化酶表达变化。3、应用流式细胞术检测西达本胺作用后Jurkat和HUT-78细胞株程序性坏死和凋亡,Real-time PCR方法检测西达本胺作用后Jurkat和HUT-78细胞株c-FLIP_L mRNA表达变化情况,western blot方法检测西达本胺作用后Jurkat和HUT-78细胞株c-FLIP_L蛋白表达变化情况。Western blot方法检测早期凋亡蛋白和程序性坏死关键蛋白的表达情况,同时检测细胞发生程序性坏死时线粒体膜电位的变化。4、Western blot方法检测细胞发生程序性坏死时西达本胺对NF-κB信号通路转录活性、关键分子蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测西达本胺对NF-κB信号通路下游基因cyclinD1、TNFα、lL-2、IL-8的调控作用,以明确西达本胺诱导T-ALL细胞程序性坏死的分子机制。结果:1、初诊及复发的T-ALL患者c-FLIP_L mRNA表达均高于正常对照者及完全缓解者(P<0.05),c-FLIP_L mRNA表达与患者危险度分级、初诊白细胞数、血乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、血羟丁酸脱氢酶(hydroxybutyrate dehydrogenase,HBDH)、CD45、HLA-DR、融合基因SIL-TAL1及复杂核型相关,与患者年龄、性别、血纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)及染色体6q-异常无关。首次化疗未达完全缓解者c-FLIP_L mRNA表达量高于完全缓解者(P<0.05)。2、T-ALL患者的骨髓单个核细胞及Jurkat和HUT-78细胞的组蛋白去乙酰化酶表达增高,应用西达本胺处理细胞后,在Jurkat和HUT-78两种细胞中均发现组蛋白去乙酰化酶表达显著减少。3、西达本胺可以诱导Jurkat和HUT-78细胞发生程序性坏死和凋亡,在应用凋亡抑制剂后,西达本胺引起细胞死亡的主要方式为程序性坏死。西达本胺可以下调Jurkat和HUT-78细胞c-FLIP_L的转录、翻译水平。当凋亡受到抑制时,西达本胺可以引起受体相互作用蛋白3(receptor-interacting protein 3,RIP3)表达增高、混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)的磷酸化水平增加,且西达本胺引起Jurkat和HUT-78细胞程序性坏死时细胞中线粒体膜电位水平降低。4、西达本胺作用细胞后,Jurkat和HUT-78细胞中I-κB和p65蛋白磷酸化水平均明显受到抑制。西达本胺可以下调周期素cyclinD1的表达量、同时上调细胞炎性因子TNFα、lL-2和IL-8的表达量。结论:1、初诊及复发的T-ALL患者c-FLIP_L mRNA表达异常增高,并与危险度分级、初诊白细胞数、血LDH、血HBDH、CD45、融合基因SIL-TAL1、复杂核型及预后密切相关,c-FLIP_L可以作为判断T-ALL预后的良好指标。2、西达本胺能够抑制Jurkat和HUT-78细胞的组蛋白去乙酰化水平。3、西达本胺可以通过下调c-FLIP_L的转录、翻译水平引起Jurkat和HUT-78细胞程序性坏死。4、西达本胺引起Jurkat和HUT-78细胞程序性坏死是通过抑制经典的NF-κB信号通路活性实现的。