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目的:研究溶血、脂肪血、不同保存温度和保存时间对血液HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA核酸检测(NAT)的影响,探索NAT检测标本在血液采集、处理及保存过程中的关键控制环节。方法:1.采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对2016年1月1日至2016年9月30日无偿献血者血液标本41552人份进行检测,筛查出HBsAg、抗-HCV、抗-HIV阳性和阴性的血液标本;2.应用罗氏MPX V2.0核酸检测试剂盒对上述标本进行检测,检测模式为6人份标本混样检测模式及拆分检测模式(单人份标本检测),分别筛选出HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA单阳性标本,并制备成12-30倍试剂盒检测下限(LOD)浓度的核酸阳性实验标本;3.将制备得到的核酸阳性实验标本分别放置于4℃、25℃、37℃、-30℃保存4h、24h、48h、72h、1w、4w(每个时间点各5份),对所有实验标本进行NAT检测,并收集Ct值进行统计分析;4.收集科研用红细胞悬液和严重乳糜血浆,制备成倍比稀释的溶血样本(1、1/2、1/4、1/8、1/16)和用于Hb检测的溶血标准样本(1/2、1/6、1/12、1/24、1/48、1/96),以及倍比稀释脂肪血样本(1、1/2、1/4、1/8)和用于TG检测的脂肪血标准样本(1/2、1/6、1/12、1/24、1/48),分别采用氰化高铁血红蛋白(HiCN)法和甘油磷酸氧化酶法,测定溶血标准样本血红蛋白(Hb)浓度和脂肪血标准样本甘油三脂(TG)浓度;使用Hamilton Microlab Star全自动混样仪,将前述倍比稀释溶血样本和倍比稀释脂肪血样本按照实验设计(见论文2.2.5-2.2.6部分),制备成核酸阳性溶血样本(溶血程度同溶血标准样本)、核酸阳性脂肪血样本(脂肪血程度同脂肪血标准样本),应用罗氏MPX V2.0核酸检测试剂盒对制备成的核酸阳性溶血样本、核酸阳性脂肪血样本进行检测,并对检测Ct值进行统计分析。结果:1.41552份无偿献血者血液标本中,ELISA筛检出HBsAg阳性205例(0.49%)、抗-HCV阳性82例(0.20%)、抗-HIV阳性35例(0.08%);2.3份单阳性病毒核酸浓度分别为:HBV DNA 100IU/ml、HCV RNA 2.7×107 IU/ml、HIV RNA 9.6×104 IU/ml。3.在标本保存时间和保存温度实验中,-30℃保存条件下保存4h至4w,HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA检测Ct值差异均无统计学意义(P>0.00333)(见表3.15、表3.16、表3.17)。在4℃保存条件下,4h、24h、48h、72h组分别和1w及4w组相比,HCV RNA检测Ct值差异均有统计学意义(P<0.00333);而4℃4h、24h、48h、72h组间HCV RNA检测Ct值差异均无统计学意义(P>0.00333)。25℃条件下,4h和72h组相比HCV RNA检测Ct值差异无统计学意义(P>0.00333),4h和1w组相比HCV RNA检测Ct值差异有统计学意义(P<0.00333)。37℃保存条件下,4h与24h组相比HCV RNA检测Ct值差异有统计学意义(P<0.00333)。HIV RNA、HBV DNA在37℃以下保存条件保存1w检测Ct值均无统计学意义(P>0.00333)。在-30℃至37℃条件下保存4h,HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA检测Ct值差异均无统计学意义(P>0.00833)(见表3.18、表3.19、表3.20)。当保存时间为24h,37℃组与-30℃和4℃组相比,HCV RNA检测Ct值差异均有统计学意义(P<0.00833),但25℃组和4℃及37℃组相比HCV RNA检测Ct值差异均无统计学意义(P>0.00833)。当保存时间为72h时,-30℃组和37℃组相比HBV DNA检测Ct值差异有统计学意义(P<0.00833),其它各组间比较差异无统计学意义(P>0.00833);4.在溶血因素实验中,Hb浓度为97g/L时HBV DNA和HIV RNA未能被检出,但仍能检测出HCV RNA(Ct值:46.3±7.9)。当Hb浓度为34g/L、17g/L、8g/L、5g/L、3g/L时,HBV DNA、HIV RNA检测Ct值分别与其对照组检测Ct值相比较差异无统计学意义(P>0.05)。Hb浓度≥8g/L时,HCV RNA检测Ct值(46.3±7.9、37.5±0.4、37.3±0.3、37.6±0.5)分别与对照组检测Ct值(36.4±0.2)相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。当Hb浓度≤5g/L时HCV RNA检测Ct值(36.4±0.6、36.2±0.5)与对照组Ct值(36.4±0.2)相比较差异无统计学意义(P>0.05);5.在脂肪血因素实验中,TG浓度≤7.93mmol/L时,HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA应用NAT检测时均不受TG的影响,各组与对照组检测Ct值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.TG浓度<7.93mmol/L时对罗氏MPX V2.0试剂检测HCV RNA、HIV RNA、HBV DNA的结果没有显著影响;2.Hb浓度>8g/L时对罗氏MPX V2.0试剂检测HCV RNA的结果有一定影响;Hb浓度<34g/L时对罗氏MPX V2.0试剂检测HIV RNA、HBV DNA的结果没有显著影响;3.72h内4℃保存的HCV RNA标本及4w内常温(25℃)保存的HIV RNA、HBV DNA标本使用罗氏MPX V2.0试剂检测效果最佳。