山苍子精油诱导口腔癌KB细胞凋亡及其机制研究

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本课题以山苍子精油为研究对象,分析三种典型产地山苍子精油的化学成分,通过体外培养口腔癌KB细胞实验,观察山苍子精油及其主要成分柠檬醛对KB细胞的凋亡、细胞周期分布、线粒体膜电位的影响,基于线粒体途径探讨山苍子精油及其主要成分柠檬醛诱导KB细胞凋亡的作用机制。实验结果显示:(1)采用水蒸气蒸馏法制备来自湖北恩施、贵州铜仁、重庆梁平产地的山苍子精油,气相色谱-质谱联用结果显示:山苍子精油含有大量单萜类、含氧萜类和倍半萜烯类化合物,其中含量最高的是柠檬醛,其次为D-柠檬烯、β-月桂烯、蒎烯等化合物。三种产地山苍子精油主要化学成分大致相同,相对含量略有不同,其中,柠檬醛含量由高到低依次为:贵州、湖北、重庆,而D-枞油烯、芳樟醇、β-榄香烯仅在湖北产的供试样品中检出,茨醇仅在重庆产的供试样品中检出。(2)MTT比色法和实时无标记细胞分析技术检测结果表明:三种产地来源的山苍子精油及其主要成分柠檬醛对于抑制KB细胞增殖呈浓度-时间依赖效应关系,且作用KB细胞12 h的IC50值组间无显著性差异(P>0.05)。(3)Annexin V-FITC/PI双染法检测KB细胞的凋亡,结果显示山苍子精油和柠檬醛分别作用KB细胞3 h、6 h和12 h时均能诱导KB细胞的凋亡,且呈时间依赖效应。山苍子精油和柠檬醛组分别与阴性对照组、顺铂组比较具有显著性差异(P<0.05)。采用PI单染法检测KB细胞周期分布情况,结果表明山苍子精油及其主要成分柠檬醛能将KB细胞阻滞在G1期,抑制其向S期发展,从而抑制KB细胞的生长繁殖。(4)利用JC-1法检测KB细胞线粒体膜电位变化结果显示:山苍子精油和柠檬醛能使KB细胞线粒体膜电位发生去极化,具有浓度依赖效应。Western blot检测山苍子精油及其主要成分柠檬醛对KB细胞Bax、Bcl-2、细胞色素C、Caspase-9和Caspase-3表达量的影响,实验结果显示山苍子精油和柠檬醛下调抗凋亡蛋白Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bax的表达量,引起KB细胞Cyt-c、Caspase-9和Caspase-3表达量显著升高(P<0.05),说明山苍子精油可通过线粒体途径诱导口腔癌KB细胞的凋亡。
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