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本实验通过应用光镜、免疫组织化学、TUNEL染色及放射免疫测量等方法,探讨不同浓度的氰戊菊酯(FenvalerateFen)对小鼠生精细胞凋亡的影响及PCNA、P53表达的变化.从形态学角度探讨氰戊菊酯对雄性小鼠生精过程的影响,为野生动物的保护及提高人口质量提供科学依据。
研究方法:选用性成熟昆明雄性小鼠40只,将40只小鼠随机分为4组,氰戊菊酯给药0.0mg/kg、1.7mg/kg、8.5mg/kg、42.5mg/kg组,每日灌胃一次,共30天,然后进行如下指标的检测。
1.小鼠摘眼球取血,离心后取上清,采取放射免疫(RIA)法检测血清睾酮的含量。
2.精子计数3脱颈椎处死小鼠,取双侧睾丸,Bouin液固定,常规石蜡包埋、切片,片厚6um,HE染色,观察睾丸生精小管形态结构的变化;SP免疫组化法检测睾丸生精细胞的PCNA、P53的表达情况,TUNEL法检测生精细胞凋亡情况。
研究结果:
1.随Fen浓度增加,精子生成量减少。
2.血浆睾酮(T)含量:对照组小鼠血清T含量为0.56nmol/L,8.5mg/kg组为0.45nmol/L,42.5mg/kg组为0.36nmol/L,8.5mg/kg、42.5mg/kg组与对照组比较P<0.05。
3.HE染色:生精小管内生精细胞稀疏、排列紊乱,管腔内有大量脱落的精母细胞、精子细胞。
4.PCNA:免疫阳性细胞主要包括精原细胞和初级精母细胞,部分支持细胞和肌样细胞也可见着色;免疫阳性产物位于细胞核,通常为棕黄色颗粒,用药组与对照组相比PCNA阳性细胞率变化不明显P>0.05。
5.p53表达:P53阳性细胞主要是精原细胞,部分支持细胞间质细胞也有着色。阳性产物主要位于细胞核,呈棕黄色,8.5mg/kg、42.5mg/kg组P53阳性细胞率明显高于对照组P<0.05。
6.凋亡:各组小鼠睾丸生精细胞均有凋亡发生,凋亡细胞位于生精小管基底部,在8.5mg/kg、42.5mg/kg组凋亡细胞成簇存在,区别于正常小鼠凋亡细胞单个散在,凋亡细胞包括精原细胞、初级精母细胞。典型的凋亡细胞表现为染色质边集,核固缩。8.5mg/kg、42.5mg/kg组凋亡管数和凋亡阳性细胞率比对照组明显升高P<0.01。
研究结论:氰戊菊酯对小鼠生精过程有影响。随着氰戊菊酯浓度的升高,精子数量减少;精子数量的减少与生精细胞的凋亡增加有关。