目的:1.通过腺病毒法建立过表达外源性人端粒酶反转录酶基因的牙周膜细胞系;2.与用慢病毒方法建立的过表达hTERT基因的牙周膜细胞系对比分析其成骨能力,以探索构建高效、稳定的更有利于牙周再生研究的牙周膜细胞系。方法:1.PCR方法扩增hTERT基因全长,构建重组腺病毒质粒pAdpshuttle-cmv-hTERT,包装腺病毒颗粒后感染人正常牙周膜细胞;2.检测hTERT mRNA的表达水平;3.检测碱性磷酸酶、骨桥素、骨钙素、骨涎蛋白、核心结合因子和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平;4.用成骨诱导液培养牙周膜细胞21天后,pH为4.1的茜素红染液染色10分钟,观察矿化结节的形成;5.CCK-8检测细胞增殖能力。结果:1.成功培养出原代牙周膜细胞;2.质粒测序结果与NCBI数据库hTERT(NM-198253.2)cDNA序列进行对比分析,与目的序列一致,成功构建了含hTERT基因的腺病毒颗粒并感染牙周膜细胞;3.感染细胞与正常牙周膜细胞形态相似,呈纤维状生长;4.qPCR结果显示hTERT及成骨相关基因在腺病毒介导牙周膜细胞中高表达,与正常细胞组及慢病毒介导的牙周膜细胞组相比有显著性差异;5.茜素红染色显示腺病毒构建的牙周膜细胞系成骨能力更强;6.CCK-8结果示腺病毒构建的牙周膜细胞系增殖能力强。结论:通过腺病毒法成功建立了过表达hTERT的人牙周膜细胞系,有较强的成骨分化能力,这为研究牙周膜再生机制提供了一个理想的细胞系,同时也为牙周病的治疗奠定了一定的研究基础。