广东省动物源食品中沙门菌的分离鉴定、耐药性分析及分子分型研究

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沙门菌(Salmonella)是一种重要的食源性致病菌,既给畜禽养殖行业造成严重损失,同时也严重危害人类健康。动物源食品是沙门菌主要来源,我国是畜牧养殖和消费大国,广东省是畜禽养殖大省,地处亚热带气候,高温多湿的气候有利于食源性致病菌的扩散传播,因此,开展广东省畜禽沙门菌的监测工作给本省食源性沙门菌的防控以及人沙门菌病的预防提供了数据支持。本研究旨在了解广东省动物源食品中沙门菌的流行特点,耐药情况以及分子特性,同时利用MLST、PFGE分子分型方法对沙门菌分离株进行遗传相关性研究,为畜禽养殖过程中抗生素的合理使用提供指导的同时,找出不同耐药菌株间的内在联系及其潜在传播途径,也为预防和控制沙门菌病提供了理论依据。本研究于2018年~2019年期间从广东省六个市(广州市,韶关市,深圳市,河源市,梅州市及肇庆市)零售市场共采集动物源食品样本960份,其中鸡肉530份、猪肉230份和鸭肉200份;共分离沙门菌500株,总分离率为52.1%。其中猪肉污染情况最为严重,阳性率高达67.0%;其次为鸭肉(50.5%)、鸡肉(46.2%)。血清型鉴定表明,动物源食品中沙门菌的血清型呈现多样性,500株沙门菌共涵盖30种血清型。其中,鸡肉中鉴定出25种血清型,以科瓦利斯、肯塔基和阿贡纳为优势血清型;猪肉中鉴定出11种血清型,以鼠伤寒、德比和罗森为优势血清型;鸭肉中共鉴定出18种血清型,以科瓦利斯、肯塔基和阿贡纳为优势血清型。进一步对分离株进行耐药性检测发现,总体耐药率最高的为四环素(93.8%),其次为磺胺复合物(88.6%)、氯霉素(53.6%)、氟苯尼考(51.4%)、萘啶酸(45.6%)等;值得注意的是,研究发现74株(14.8%)对环丙沙星耐药的沙门菌。不同血清型沙门菌的耐药情况差异较大。特别是肯塔基沙门菌耐药严重,多重耐药率高达91.8%。进一步研究发现,肯塔基沙门菌表现出对双gyrA突变和parC突变与多个PMQR基因结合所产生的耐药环丙沙星的MICs值较高。经MLST和PFGE溯源分析后发现,肯塔基沙门菌主要为ST198型(21株,91.3%);来自不同地区的分离株均携带qnr B、qnr S和aac(6’)-Ib-cr基因,同时伴有par C的T57S突变,对环丙沙星有较高的MIC值(8~32μg/ml)。由于我国对鸭肉源沙门菌的研究数据有限,我们重点对鸭肉源沙门菌进行流行特点、分子特性(耐药基因和毒力基因)检测和PFGE溯源分析后发现:广东省鸭肉中沙门菌污染严重(41.1%),分离株血清型复杂多样,耐药基因总体检出率最高的为bla TEM基因(100.0%),其次为str A基因(94.1%)、aad A1基因(83.8%)、qnr S基因(79.0%)等。在毒力相关基因方面,毒力岛相关基因(mgtC,siiD,和sopB)、肠毒素基因stn和菌毛基因fim A所有菌株均携带;反观毒力质粒基因携带情况较低,spv C基因(6.6%)和spv R基因(5.3%)。分析不同血清型沙门菌发现,鼠伤寒和肠炎沙门菌可携带9种毒力相关基因,潜在致病力较强。进一步PFGE溯源分析发现,沙门菌菌株基因型呈现复杂多样化。综上所述,广东省动物源食品中存在沙门菌的高污染现象,其分离株血清型复杂多样,因地区和动物源食品而异;多重耐药广泛分布于各种血清型沙门菌中,这大大增加了食源性沙门菌感染的风险。进一步溯源分析发现,多重耐药菌株具有不同程度的同源性,构成了一个潜在的食品安全问题。同时,对环丙沙星耐药的肯塔基沙门菌(ST198型)存在跨地区交叉传播的现象,这对公共卫生构成了潜在的威胁。
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