背景:银屑病作为临床常见的一种慢性炎症性皮肤病,其典型临床表现为边界清晰的鳞屑性红斑块[1,2],组织病理以表皮角质形成细胞(KC)过度增生及分化异常、真皮炎细胞浸润为特征。银屑病易反复且病情顽固,对患者生活质量影响很大。但关于银屑病的确切发病机理尚未完全阐明,其治疗并不理想。因此,关于银屑病发病机制的相关研究一直是皮肤科学界关注的热点。以往的研究发现,KC和T细胞的相互作用在银屑病的发生发展中具有重要作用,是银屑病发病的关键机制之一[3]。KC与T细胞相互作用所形成的恶性循环,是使银屑病皮损经久不愈的重要原因之一。因此,想要更进一步探索阐明银屑病的发病机制,必须更进一步深入研究KC与T细胞之间的相互作用,这对寻找新的治疗方法具有重大意义。近期,有研究证实,小鼠γδT细胞表面的CD100分子可与KC表面的Plexin-B2结合,促进γδT细胞的形态改变和迁移[4],提示CD100-Plexin B2是介导γδT细胞与KC相互作用的重要机制。CD100,即Semaphorin 4D,是一种重要的免疫调节分子,在T细胞表面高表达,其作用为调节T细胞和B细胞应答,并以可溶型形式(s CD100)以较低水平存在于血清中。CD100的高亲和力受体是Plexin-B1和Plexin B2,表达于多种上皮和内皮细胞以及神经和免疫细胞,参与多种组织细胞的增殖和迁徙。前期工作中,通过分析s CD100在银屑病患者的表达,我们发现,相比于正常对照,进展期银屑病患者血清中s CD100表达水平明显升高,并且,Plexin B2也在银屑病患者皮损KC上高表达,在湿疹和正常表皮组织中的表达量则很低,提示CD100-Plexin B2很可能通过介导KC和γδT细胞的相互参与了银屑病发病,但确切作用及其机制尚不明确。我们提出假说认为,CD100与Plexin B2相互作用参与了银屑病发病:一方面银屑病患者体内s CD100与皮损KC表面Plexin B2结合,调控KC增殖、迁移或其他生物学活性,另一方面KC通过其膜表面Plexin B2作用于表皮内γδT细胞,调控其在表皮内的活化和迁移。目的:1.进一步明确CD100及Plexin B2在银屑病患者组织中的表达,明确CD100对KC的作用。2.利用咪喹莫特(IMQ)诱导的银屑病小鼠模型,阐明CD100及Plexin B2在小鼠银屑病模型中的作用。3.在体外细胞培养的基础上,阐明CD100-Plexin B2相互作用的分子机制。方法:1.利用免疫组化、Western-blot、ELISA及RT-PCR与Real-time RT-PCR等方法,分析CD100及其受体Plexin B2在银屑病患者血清及皮损的表达。2.利用CD100体外作用于Hacat细胞和原代KC,分别从细胞生长、增殖及凋亡等多个方面,进行CD100对KC作用的评估;进一步利用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验,观察分析原代KC和Hacat细胞经CD100体外刺激24h后,细胞的迁移和侵袭改变。3.构建咪喹模特银屑病小鼠模型,检测皮损CD100和Plexin B2的表达;以Plexin B2-si RNA作用于银屑病小鼠模型,从大体、HE、浸润细胞等层面分析Plexin B2沉默对银屑病模型的影响,进一步分析Plexin B2沉默后皮损浸润细胞类型、表达细胞因子等情况,以探索Plexin B2发挥作用的机制。4.体外细胞培养中干涉Plexin B2的表达,观察Plexin B2表达降低对原代KC和Hacat细胞生长、增殖、凋亡等不同方面的影响,并检测Plexin B2沉默后,相关细胞因子表达的变化。5.基于体外细胞培养,分析CD100-Plexin B2作用的下游信号通路。结果:1.银屑病患者外周血中s CD100表达水平较正常人明显增高,银屑病患者皮损局部CD100及plexin B2表达水平明显高于正常皮肤及正常人。2.s CD100能够促进Hacat细胞和原代KC增殖、迁移和侵袭,抑制Hacat细胞和原代KC凋亡;干涉Plexin B2能够抑制CD100诱导的KC增殖,提示CD100是通过与Plexin B2相互作用来促进KC的增殖和侵袭;3.成功构建咪喹模特(IMQ)诱导的银屑病小鼠模型,IMQ诱导七天后,小鼠耳部皮肤出现明显增厚并伴有红肿和大量鳞屑,皮损Plexin-B2表达增高;干涉Plexin B2表达后,小鼠耳部皮肤的增厚、红肿和鳞屑明显缓解,皮损T细胞、树突状细胞、巨噬细胞等淋巴细胞的浸润显著减少,并且,同时可观察到IL-17、IL-22、IL-36、CXCL1、CCL20等炎症相关细胞因子的表达水平明显下降,表明Plexin B2在IMQ银屑病模型中发挥重要作用。4.干涉Plexin B2能明显抑制Hacat细胞增殖,促进细胞凋亡,明显抑制细胞侵袭和迁移能力;干涉Plexin B2能够抑制银屑病相关细胞因子、诱导KC趋化因子产生,提示影响相关细胞因子和趋化因子的产生是Plexin B2发挥功能的重要方式。5.干涉Plexin B2可抑制Hacat细胞中的Akt及Erk信号的活化,提示CD100作用于Hacat细胞主要是通过Plexin B2激活下游Akt和Erk信号通路来发挥作用。结论:我们发现CD100及其配体Plexin B2在银屑病异常表达;CD100-Plexin B2相互作用可以促进KC的迁移及增殖;Plexin B2通过影响相关细胞因子及趋化因子的分泌、调控局部皮肤淋巴细胞浸润参与小鼠银屑病模型的发病;CD100-Plexin B2的下游信号途径包括Akt和Erk信号通路。我们发现并首次揭示了CD100-Plexin B2分子间相互作用在银屑病发病中的重要作用及潜在机制,为银屑病治疗提供了新思路。