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因为中国对虾比较显著的性别二态性可以给生产带来巨大利益,性控研究一直是国际同行研究的热点与难点,对对虾性别相关核酸片段的研究不但具有广阔的应用价值,而且还可以为进一步的研究提供理论依据和指导; 由于对对虾抗病机制了解的甚少,对虾养殖业因病害大规模爆发而损失惨重,因而免疫基因的研究有助于弄清对虾的抗病机理,为对虾病害的预防和控制奠定基础。本研究运用差异显示技术,筛选了中国对虾性别相关核酸片段; 利用cDNA文库和消减文库、EST大规模测序、基因芯片和生物信息学等技术手段,对中国对虾免疫相关基因进行研究,获得了一些重要进展,结果如下: 1.通过双随机引物差异显示技术,筛选到了一条中国对虾性别相关核酸片段,该片段大小为±500bp。在PCR反应条件相同的情况下,该片段表现为在雌性个体的扩增产物要多于雄性个体。将该片段克隆后进行了测序,并根据测序结果设计了特异性PCR扩增引物。该片段的差异在DNA和RNA中都可以检测出,可以作为探针为性别控制技术提供快速检测手段。2.构建了中国对虾头胸部组织的cDNA文库并首次对中国对虾EST进行大规模的测序,共获得EST 10446条,拼接后得到3120条无冗余基因片段。在中国对虾EST数据的分析中,通过功能注释,共获得了1373条已知基因,其余1747条unique基因为未知基因。从EST数据中挖掘出微卫星324个,约占总EST数目的3%,并对中国对虾的新陈代谢途径、基因功能分类等重要生物学信息进行了分析。3.构建了中国对虾WSSV感染前后的正、反向抑制性消减杂交cDNA文库(正向库容为3.7e×10~4,反向文库为1.2e×10~4)。获得了相当数量的分别在正常和感染虾体内特异表达的基因,为抗WSSV基因的筛选奠定了基础。4.利用已知序列的EST和对虾消减文库中的克隆,构建了中国对虾表达谱芯片。该芯片共有待研究cDNA片段3114个,其中1578个克隆来自EST数据中的unique基因,1536个克隆来自消减文库(正、反向文库各768个)。5.利用cDNA芯片杂交技术,对WSSV感染后6小时组织和濒死对虾组织进行了研究,筛选与抗WSSV病毒相关的基因。经数次实验结果叠加后,来自