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目的:根据“保健食品检验与评价技术规范”的相关要求,对三根颗粒进行安全性评价和免疫功能检测,通过免疫低下小鼠的免疫功能的影响实验,正常大鼠免疫调节作用实验,阐明三根颗粒和三根散对免疫功能的作用及其作用机制。方法1.对三根颗粒进行小鼠经口最大耐受量测定、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验、30天喂养试验以评价其安全性。2.免疫功能检测实验中,取昆明种小鼠,分正常组及三根颗粒低、中、高剂量组,灌胃给药0.5、1、3g/kg,每日一次,共给药32天,测定小鼠体重、脏器指数、迟发型变态反应、半数溶血值、抗体生成数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数等。3.免疫低下小鼠的免疫功能的影响实验中,取BALB/C小鼠,随机分为正常组、模型组,三根颗粒低剂量组、三根颗粒高剂量组及三根粉末低剂量组、三根粉末高剂量组。除正常组外小鼠腹腔注射环磷酰胺,以建立免疫低下模型。给药组灌胃给相应药物蒸馏水混悬液,正常组和模型组灌胃给同体积蒸馏水,每日一次,连续给药32天,期间每周测定小鼠体重。末次给药后取材,测定小鼠胸腺和脾脏指数。用ELISA法测定小鼠血清Th1有关的细胞因子IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ,Th2有关的细胞因子IL-6、IL-10、TGF-β,Th17有关的IL-17及抗氧化指标SOD、GSH-px、MDA等。用RT-PCR法测定小鼠脾脏组织IFN-γ、IL-4基因表达水平。4.正常大鼠免疫调节作用实验中,取Wistar大鼠,灌胃给三根颗粒和三根粉末,每日一次,共给药42天。ELISA法测定血清及脾脏相关指标,用转录组学技术检测并比较各组之间差异表达基因,并进行GO功能分析。结果:1.三根颗粒小鼠经口最大耐受量大于15g/kg BW,按急性毒性分级属无毒级。经Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性,在受试剂量范围未见致突变活性。30天喂养试验中,大鼠体重、摄食量、食物利用率、脏器检查、脏器重量、脏器指数、血液学和血液生化学检查结果表明,各剂量组与正常组比较,各检验项目均无显著差异。病理组织学检查结果表明,正常组和高剂量组雌、雄性大鼠肝、肾、胃、肠、脾、卵巢及睾丸均未发现明显损伤性病理变化。30天喂养试验未发现有明显毒性作用。2.免疫功能检测实验结果,与正常组比较,该受试物在1.00g/kg BW组能提高小鼠足跖肿胀度、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率和吞噬指数;在3.00g/kg BW组能提高小鼠跖肿胀度、提高小鼠抗体生成细胞数、提高小鼠半数溶血值、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率和吞噬指数。受试物对小鼠体重增长无不良影响。3.免疫低下小鼠的免疫功能的影响实验中,与正常组比较,模型组小鼠IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TGF-β、GSH-px降低,脾脏IL-12、IL-10、TNF-α、TGF-β、SOD均显著降低。三根粉末高剂量组小鼠血清TNF-α、TGF-β、GSH-px,脾脏IL-12,三根颗粒低剂量组血清IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ、SOD、GSH-px,脾脏IL-12、TNF-α、IFN-γ、IL-17、三根颗粒高剂量组血清IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ、TGF-β、SOD、GSH-px,脾脏IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ、TGF-β、IL-17、SOD均显著提高。同时脾脏组织中IFN-γ、IL-4基因在三根粉末高剂量组、三根颗粒低剂量组和高剂量组中表达均有提高。4.正常大鼠免疫调节作用实验中,与正常组比较,三根粉末低剂量组大鼠血清MDA明显降低;三根粉末高剂量组血清MDA明显降低,脾脏IFN-γ、IL-2、IL-6、TGF-β显著提高;三根颗粒组血清MDA明显降低,脾脏IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-6、IL-10、TGF-β显著提高。用转录组学技术检测差异表达基因及相关分析结果,正常组共测得14269个基因,三根粉末组低剂量组共测得14373个基因,三根高剂量组共测得14416个基因,三根颗粒组共测得14446个基因。其中与正常组比较,三根粉末低剂量组共测得179个差异基因,其中86为上调,93为下调。三根高剂量组共测得293个差异基因,其中197为上调,96为下调。三根颗粒组共测得221个差异基因,其中95为上调,126为下调。对于差异基因进行GO分析,与正常组比较,三根粉末高剂量组找到1个GO-Term,三根颗粒组找到9个GO-Term。结论:1.多种毒性试验结果表明,三根颗粒无急性毒性,无基因毒性,无慢性毒性,其安全性很高。2.免疫功能检测实验结果表明,三根颗粒能提高小鼠细胞免疫,体液免疫和巨噬细胞功能3.三根颗粒和三根粉末,对于免疫低下小鼠和正常大鼠均能调节免疫功能作用,2.6g/kg剂量免疫调节作用更强。3.ELISA法、RT-PCR法及转录组学技术测定相关指标结果表明,三根颗粒和三根粉末免疫调节的机制可能与调节机体IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、TGF-β等细胞因子和SOD、GSH-px等酶的活性及IFN-γ、IL-4等基因表达有关。