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目的胰腺癌是目前恶性程度最高的肿瘤之一,其五年生存率低于5%。缺乏有效的抗胰腺癌药物是导致预后差的重要原因之一。近年来,靶向抑制多种信号通路蛋白逐渐成为化疗药物研发的重要方向。肝细胞生长因子(HGF)与其受体c-MET结合后,能激活胰腺癌多种信号通路,具有较强的促有丝分裂、组织成形、诱导上皮细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用,影响胰腺癌细胞发生、发展。但HGF/c-MET如何激活下游PI3K-Akt-mTOR信号通路、ERK-MAPK信号通路的关键机制尚未完全明确。因此,本研究旨在观察HGF/c-MET对胰腺癌细胞生物学行为的影响,解析Gαi1/3蛋白激活下游信号通路的具体机制。方法1)利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落试验(Clonogenicity assay)观察HGF对胰腺癌细胞生存和增殖的影响。2)利用Gαi-shRNA慢病毒转染方法,降低胰腺癌细胞中Gαi蛋白的表达,观察HGF对胰腺癌细胞生物学行为的影响。3)蛋白质免疫印迹(Western Blot):Western Blot法检测胰腺癌和小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中Gαi蛋白、PI3K-Akt-mTOR、ERK-MAPK信号通路中各种蛋白及其活化水平的变化。探讨在胰腺癌和MEFs细胞中,Gαi在HGF激活PI3K-Akt-mTOR、ERK-MAPK信号通路的具体机制。结果1)HGF能促进胰腺癌细胞Patu8988的体外增殖和克隆形成(P<0.05)。2)慢病毒转染降低胰腺癌细胞中Gαi蛋白表达后,可显著降低胰腺癌细胞的增殖与克隆形成能力(P<0.05)。3)在胰腺癌细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)中,Gαi1/3是HGF/c-MET激活下游PI3K-Akt-mTOR、ERK-MAPK信号通路的关键蛋白。4)Gαi蛋白处于Gab1上游,共同介导HGF/c-MET激活下游PI3K-Akt-mTOR、ERK-MAPK信号通路。结论HGF作用于c-MET,激活下游PI3K-Akt-mTOR、ERK-MAPK信号通路,促进胰腺癌细胞的增殖和克隆形成。而Gαi是该信号通路中的关键蛋白,在促进胰腺癌细胞生存中发挥重要作用。