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目的:Erastin是一种铁死亡诱导剂,可诱导细胞发生铁死亡。本研究旨在探究Erastin是否可诱导人ALL细胞株Jurkat细胞发生铁死亡,以及自噬抑制剂3-MA是否作为协同作用参与其中,并探讨可能参与铁死亡的信号通路,为进一步阐明铁死亡作用机制提供基础的依据。方法:在Jurkat细胞处于对数生长期时进行收集,分别用1.25、2.5、5、10、15、20和40μmol/L的Erastin处理,24h后用CCK-8试剂盒检测OD值,最终选择细胞抑制率在50%处的Erastin浓度(10μmol/L)用于后续实验。用Erastin处理Jurkat细胞的同时分别加入Fer-1(铁死亡抑制剂)、Z-VAD-fmk(凋亡抑制)、Necrostatin-1(坏死抑制剂)、3-MA(自噬抑制剂),24h后用CCK-8法检测细胞的增值情况、GSH试剂盒检测和MDA试剂盒检测分别检测Jurkat细胞内谷胱甘肽含量和脂质的过氧化水平,从而确定细胞是否发生铁死亡。在基因水平上检测GPX4和SLC7A11,来进一步确定Jurkat细胞发生铁死亡。采用Real-time PCR的方法检测铁死亡通路P62-Keap1-NRF2在基因层面的表达,用蛋白质印迹实验(Western-Blotting)检测Erastin处理后铁死亡通路P62-Keap1-NRF2蛋白的表达。结果:(1)铁死亡诱导剂Erastin可以对Jurkat细胞产生毒性作用,随着Erastin暴露浓度的提高,细胞抑制率逐渐上升。(2)对Jurkat细胞用Erastin、Erastin+Fer-1、Erastin+Z-VAD-fmk、Erastin+Necrostatin-1、Erastin+3-MA五种药物组合分别处理,24h后用CCK-8法检测细胞的增殖毒性、GSH试剂盒检测和MDA试剂盒检测分别检测Jurkat细胞内谷胱甘肽含量和脂质的过氧化水平。实验结果表明Erastin+Fer-1组的细胞抑制率低于Erastin组,细胞内GSH含量高于Erastin组,MDA水平低于Erastin,且Erastin+3-MA组的细胞抑制率高于Erastin组,细胞内GSH含量低于Erastin组,MDA水平高于Erastin组。(3)用10umol/L的Erastin、1umol/L的Fer-1、5mmol/L的3-MA分别处理Jurkat细胞,24h后用Real-Time PCR检测Erastin对细胞内GPX4、SLC7A11基因水平的影响。实验结果表明Erastin组GPX4和SLC7A11 m RNA的相对表达量高于Erastin+3-MA组。(4)Real-Time PCR结果显示P62,Keap1,NRF2的m RNA含量中,Erastin组均高于Erastin+Fer-1组,低于Erastin+3-MA组。Western-Blotting结果显示,Erastin+3-MA组中,P62、NRF2的表达均高于对照组,Keap1的表达低于对照组。在Erastin组中,P62、NRF2的表达均高于Erastin+Fer-1组,Keap1的表达低于Erastin+Fer-1。结论:铁死亡诱导剂Erastin可诱导Jurkat细胞发生铁死亡,且自噬抑制剂3-MA很可能是发生铁死亡的协同因素,在Jurkat细胞中eastin诱导发生铁死亡时通路P62-Keap1-NRF2被激活。