Foxp3是一种抑制性转录因子,是调节性T细胞（regulatory Tcells,Treg）的相对特异性标志,对Treg的发生、发育、功能的维持与发挥起着重要作用。Foxp3的基因突变可导致Treg细胞介导的免疫耐受缺陷。研究发现,外源性Foxp3的表达可使非调节性T细胞具有类似Treg细胞样的表型及免疫抑制功能。HIV-1（human immunodeficiency virus type 1）基因编码的反式激活蛋白（transactivator,TAT）中的蛋白转导结构域（protein transductiondomain,PTD）能够携带外源性蛋白穿过几乎所有的真核细胞膜而进入细胞浆和细胞核内,同时具有高效、快速和不影响蛋白活性等特点。目的:构建带PTD原核表达载体pET28a-PTD-hFOXP3、pET28a-PTD-eGFP-hFOXP3,表达并纯化PTD-hFOXP3、PTD-eGFP-hFOXP3融合蛋白,研究融合蛋白穿膜转导进入T细胞的效率及转导蛋白前后T细胞对活化刺激的反应变化。方法:利用分子生物学技术构建pET28a-PTD-hFOXP3、pET28a-PTD-eGFP-hFOXP3原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta（DE3）中表达融合蛋白,经Ni²⁺分离柱纯化融合蛋白。Western-blot技术检测融合蛋白表达的正确性,流式细胞分析技术、Western-blot技术及激光共聚焦检测融合蛋白穿过细胞膜进入人T淋巴细胞瘤株Jurkat细胞中的能力,利用淋巴细胞增殖试验检测其对T细胞的功能影响。结果:正确构建了pET28a-PTD-hFOXP3、pET28a-PTD-eGFP-hFOXP3融合蛋白表达载体,表达并纯化了PTD-hFOXP3、PTD-eGFP-hFOXP3融合蛋白。通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜和western-blot分析证实表达的融合蛋白均能高效的转入细胞内;转导了PTD-hFOXP3融合蛋白的Jurkat细胞增殖受到明显抑制。结论:成功表达具有生物学活性的PTD-hFOXP3、PTD-eGFP-hFOXP3融合蛋白,为进一步研究PTD-hFOXP3的免疫调节功能及其临床应用奠定基础。