论文部分内容阅读
在中国，草鱼（Ctenopharyngodon idella）是一个重要的淡水养殖鱼种，也属于大型鲤科经济鱼种，养殖规模位居“四大家鱼”之首。然而每年草鱼呼肠孤病毒（grass carpreovirus, GCRV）引起的草鱼出血性疾病，已经造成了很严重的经济损失。GCRV是水生呼肠孤病毒属的一员，同时也是双链RNA病毒。在防治鱼类病毒感染时，先天免疫系统起到了极重要的作用。本研究以草鱼中肾为研究对象，选择12种免疫相关基因：TLR（TLR3、TLR7和TLR22）；RLR（RIG-I、MDA5和LGP2）；NLR（NOD1和NOD2）；接头分子（MyD88和IPS-1）；干扰素（IFN-I）和免疫球蛋白(IgM）。在病毒GCRV刺激后，用qRT-PCR方法测定各个抗病相关基因在中肾组织的表达量；在GCRV、poly(I:C)、LPS和PGN刺激后，各抗病相关基因（除IgM）在中肾原代细胞的表达也相对定量化。具体结果如下：1.用GCRV病毒感染草鱼，并检测草鱼12个免疫相关基因在中肾的表达，其结果表明：TLR3、TLR7、TLR22、MyD88、RIG-I、MDA5、LGP2、IPS-1、NOD1、NOD2和IFN-I基因的mRNA表达量都增加，差异均显著（p<0.05），且从72h开始IgM基因的mRNA表达量也发生明显的变化（p<0.05）。2.分别用GCRV、poly(I:C)、LPS和PGN刺激中肾原代细胞后，TLR3、TLR22和MyD88基因的mRNA相对表达量呈上升趋势，差异均显著（p<0.05）；在GCRV刺激下，TLR7在中肾细胞的表达量变化明显，然而其他三种刺激对其影响不明显；在这四中刺激下，RIG-I、MDA5、LGP2和IPS-1的表达量变化明显，且均呈上升趋势；当受到各种刺激时，NOD1和NOD2两个基因的表达量都增加，但NOD1和NOD2表达趋势的程度不尽相同；在各种刺激下，IFN-I的表达量也快速上升。这表明在抗病毒和抗菌免疫过程中，刺激发挥着重要的作用。以上结果充分表明，在草鱼先天性免疫中，中肾扮演着一个很重要的角色。在弄清硬骨鱼体内外的抗病毒和抗菌免疫微生物识别机制方面，尤其是专一性准确识别信号转导通路和免疫相关基因方面，尚有很多工作要做。寻找有助于预防病毒和细菌感染的新方法是非常必要的，这也将为水产动物抗病性研究及选择有效药物防治疾病，提供理论基础。