论文部分内容阅读
目的：双酚A（Bisphenol A，BPA）是一种雌激素干扰物，广泛用于聚碳酸酯和环氧树脂的生产过程以及产品中。随着塑料制品在日常生活中的广泛应用，人们暴露于双酚A的机会也逐渐增多。许多动物试验研究已经证实双酚A具有生殖毒性作用，并且能够影响正常的代谢功能。也有研究表明，双酚A能够影响胰岛细胞的功能并诱发胰岛素抵抗。本试验旨在了解双酚A是否会对INS-1细胞产生DNA损伤，并初步探讨其可能存在的毒性效应机制。方法：本实验选择大鼠胰岛β细胞（INS-1），在不同浓度双酚A25、50、100μM条件下，采用单细胞凝胶电泳试验（SCGE）和蛋白质印迹法（western blot）检测双酚A诱导的DNA损伤及DNA损伤相关蛋白表达的情况。为了进一步探讨研究这种DNA损伤的可能机制，本次试验采用荧光分子探针2’,7’—二氢二氯荧光素（DCFH）及羟基喜树碱荧光素（OPT）的方法，检测细胞内活性氧类物质（ROS）和细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的变化情况，并通过N-乙酰半胱氨酸（NAC）的抗氧化干预试验，进而说明氧化应激性损伤在DNA损伤中的作用。试验结果用统计分析软件SPSS v11.5进行统计分析。结果：彗星试验显示双酚A能够引起INS-1细胞DNA链断裂，呈彗星样拖尾，随着双酚A试验剂量的增加核DNA向彗星尾部迁移增多，尾长增加，尾矩以及尾DNA%明显增大，与DMSO溶剂对照组相比差别显著，不同剂量组间差别具有统计学意义。蛋白印迹法显示DNA损伤相关蛋白p53及p-Chk2(T68)的表达水平明显升高。发现试验细胞内活性氧类物质生成明显增多，还原型谷胱甘肽水平显著下降，提示了氧化应激状态存在。经N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化剂干预后，显示细胞内活性氧物质生成减少，同时细胞DNA链断裂情况减轻，DNA损伤蛋白p53及p-Chk2(T68)的表达水平相应下降。结论:双酚A能够引起INS-1细胞的DNA损伤，造成DNA损伤蛋白（p53，p-Chk2(T68)）的表达增加。双酚A能够诱导INS-1细胞中活性氧物质生成增多，使细胞处于氧化应激状态，N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预试验显示，INS-1细胞内活性氧物质生成明显减少，细胞DNA链断裂程度减轻，损伤蛋白表达水平明显下降，说明DNA损伤作用机制与氧化应激有关。