灰直纹螟—青钱柳虫茶营养成分及抗肿瘤作用研究

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虫茶是我国特有的林业资源昆虫产品,是由特种昆虫取食特种植物所排出的粪粒而制成。灰直纹螟是贵州主要产虫茶昆虫之一,主要分布于贵州黔东南地区,其寄主植物有化香树和青钱柳。本文测定和评价了灰直纹螟-青钱柳虫茶的主要营养成分及保健和药用价值,同时对灰直纹螟-青钱柳虫茶的抗肿瘤作用效果进行了宏观方面与分子表达方面的研究,为该虫茶品种资源的合理利用,以及开发安全、有效、拥有自主知识产权的治疗肿瘤新药方面提供科学的理论依据和材料。本文主要研究结果如下:1.灰直纹螟-青钱柳虫茶营养成分分析与评价分析了灰直纹螟-青钱柳虫茶(以下简称:灰青虫茶)一般营养成分、茶特征物质、氨基酸、脂肪酸、矿物质组成,同时也对其重金属含量进行安全性评价,并以仓樟虫茶、紫白虫茶和常规茶为参照,对灰青虫茶的营养价值进行了评价。结果表明,灰青虫茶含有较高的茶多酚物质;氨基酸总含量较高,其8种必需氨基酸约占氨基酸总量的39.3%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为64.76%,必需氨基酸评价显示灰青虫茶的氨基酸模式接近鸡蛋且优于大豆;矿物质含量丰富,其中以Ca含量最高,同时含有丰富的K元素,K/Na之比为208.04;重金属含量无超标。灰青虫茶氨基酸和矿物质含量丰富、种类齐全,氨基酸模式较合理,是优质蛋白和安全的矿物质保健饮品,具有较高的营养价值。2.灰直纹螟-青钱柳虫茶体外抗癌活性检测通过MTT比色法检测灰青虫茶在体外对MCF-7乳腺癌细胞和SGC-7901胃癌细胞株的增殖抑制活性,结果表明,灰青虫茶对该两种细胞具有良好抗癌活性,如虫茶浓度为500μg·mL-1时处理72h后,对MCF-7乳腺癌细胞的抑制率为(95.18±2.48)%,对SGC-7901胃癌细胞的抑制率为(90.92±2.27)%。灰青虫茶对同一肿瘤细胞在不同时间段的诱导凋亡能力不同,同时虫茶对肿瘤细胞的抑制率与浓度及处理时间呈正相关,如48 h内虫茶浓度为100μg·mL-1至500μg·mL-1时其对MCF-7乳腺癌细胞的抑制率分别为(31.82±2.32)%、(42.98±1.89)%、(54.97±2.13)%和(64.78±1.86)%。虫茶对不同肿瘤细胞的诱导凋亡能力也不相同,如对人MCF-7乳腺癌细胞,36 h后虫茶的IC50为(322.17±1.42)μg·mL-1,48 h后虫茶的IC50为(178.72±0.94)μg·mL-1;但对人SGC-7901胃癌细胞,36 h后虫茶的IC50为(364.06±0.97)μg·mL-1,48 h后虫茶的IC50为(220.35±1.21)μg·mL-1。这表明,不同的肿瘤细胞对于虫茶的敏感性具有差异,其原因很可能是由于不同的肿瘤细胞来源于不同的组织器官,它们之间具有基因表达的差异性以及不同的代谢特点。3.灰直纹螟-青钱柳虫茶体外抗肿瘤细胞凋亡机制检测实时荧光定量PCR是监测肿瘤细胞中微小残留分子标志的必备研究工具之一,通过荧光定量PCR分别检测了MCF-7乳腺癌细胞和SGC-7901胃癌细胞中相关凋亡基因的表达水平。结果发现,灰青虫茶处理后的MCF-7乳腺癌细胞和SGC-7901胃癌细胞中的Fas、FasL、Bax和caspase家族促凋亡基因的表达水平明显上调,同时对于抗凋亡基因Bcl-2而言,灰青虫茶可以显著下调其mRNA的表达水平。Fas和FasL作为外源性凋亡通路相关基因,Bax和Bcl-2作为内源性凋亡通路相关基因,而实验结果表明灰青虫茶可以同时触发MCF-7乳腺癌细胞和SGC-7901胃癌细胞中的内源性和外源性凋亡途径,从而诱导其发生凋亡。同时灰青虫茶对基因表达的影响呈现剂量依赖性。
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