灰葡萄胞菌(Botrytis cinerea),即灰霉菌,是一种腐生病原真菌,它的营养方式为死体营养型,能够侵染上百种单子叶及双子叶植物引起灰霉病,严重危害作物生产、蔬菜质量以及水果保鲜。为了进一步探究番茄对灰霉菌的抗病机制,我们在本实验中采用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)、基因过表达等技术,研究了一个辅助分子伴侣调节因子蛋白家族SlBAG在番茄对灰霉菌抗性反应中的功能以及可能的作用机制。分子伴侣(molecularchaperones)可以在蛋白质折叠、蛋白质质量控制、多亚基蛋白复合体的组装以及蛋白质的运输等过程中发挥重要作用。BAG(Bcl-2-associated athanogene)家族是一个进化上高度保守的辅助分子伴侣蛋白家族,在多种植物、哺乳动物以及酵母菌中均已经发现了其同系物的存在。BAG家族蛋白具有共同的保守结构域,可以调控热激蛋白的功能,也可以与一系列转录因子和信号蛋白等形成复合体从而在各种生理过程中发挥作用。人们在哺乳动物中关于BAG家族的研究开始较早并且已经非常的广泛和深入;在拟南芥和水稻中已经分别鉴定到7个和6个BAG家族成员,它们不仅能够在植物的生长发育过程中发挥调控作用,还具有调节植物对非生物胁迫以及对腐生真菌抗病性的功能;但是在番茄中,BAG家族蛋白在对生物或非生物胁迫以及生长发育等过程中发挥的作用还不是很清楚。在本研究中,我们在番茄基因组数据库中搜索,利用生物信息学方法鉴定并克隆到10个番茄SlBAG分子伴侣家族成员。蛋白保守结构域分析表明,这10个番茄SlBAG蛋白均包含一个保守的BAG结构域,并且预测的番茄SlBAG蛋白亚细胞定位是细胞核、线粒体或叶绿体。我们利用VIGS技术对10个番茄SlBAG基因分别进行沉默,并对沉默植株接种B.cinerea。结果发现,SlBAG5沉默后增强了植株对灰霉菌的抗性;通过瞬时过表达以及病毒介导的过表达技术,发现SlBAG5过表达后能够引发活性氧积累以及细胞死亡等现象;利用实时荧光定量检测我们发现,SlBAG5的沉默和过表达还会影响B.cinere 诱导的JA/ET途径相关响应基因(SlNR1、SlLapA1、SlMYC2和SlJAZ7)以及SA途径相关响应基因(SlPR1b、SlPRP2)的表达水平;通过Luminol化学发光法我们检测到,SlBAG5的沉默和过表达能够改变chitin介导的PTI反应,如ROS的产生以及PTI相关基因SlPTI5、SlLRR22、SlERKY28的表达水平等。除此之外,我们还利用酵母筛库的方法,筛选到可能与SlBAG5互作的8个蛋白,并通过双分子荧光互补实验、CO-IP等其他实验方法进一步验证它们之间的互作。