【摘 要】
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金属硫蛋白metallothionein(简称MT)是一种小分子量生物活性蛋白。它具有防辐射、抗氧化、清除自由基的功能,作为一种新型的化妆品原料,添加化妆品中被广泛应用。现如今,利用植物
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金属硫蛋白metallothionein(简称MT)是一种小分子量生物活性蛋白。它具有防辐射、抗氧化、清除自由基的功能,作为一种新型的化妆品原料,添加化妆品中被广泛应用。现如今,利用植物系统大规模生产药用蛋白已成为研究的热点问题。植物油体系统表达的外源蛋白,具有降低生产成本,简化分离提取工艺的优点,为大规模生产外源蛋白奠定基础。本研究通过查询NCBI上的Genbank(NO.U11256.1)中金属硫蛋白的碱基序列,并以此为模板设计特异性引物,利用PCR扩增技术克隆得到金属硫蛋白基因,并与油体蛋白基因融合形成融合基因(Oleosin-MT),将其融合基因插入到pCAMBIA1301表达载体中,将p1301-Oleosin-MT重组质粒转入根癌农杆菌EHA105中,利用Floral Dip法和农杆菌介导法,侵染拟南芥和转化红花,使融合基因在拟南芥和红花中得到表达,得到结果如下:1.对转基因拟南芥植株进行分子生物学检测,SDS-PAGE表明融合蛋白基因已成功转入到模式植物拟南芥中,且得到表达。2.对金属硫蛋白的抗氧化活性的鉴定,表明植物系统表达的金属硫蛋白具有良好的抗氧化能力。3.通过PCR,RT-PCR检测证实Oleosin-MT基因初步整合到红花基因组中。本研究对Basta筛选红花中,Basta添加量与时间的确定进行了优化,缩短了红花组培的筛选时间,从而更高效的筛选出红花抗性植株。同时也对植物系统表达的金属硫蛋白的抗氧化功能进行了验证,确实具有抗氧化活性,这为利用植物系统表达外源蛋白奠定了良好的基础,为后续利用植物表达系统开发具有功效的保健品,化妆品提供了理论依据。
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