小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV）是副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）的成员,其基因组为单股、不分节段的负链RNA,全长测序多为15948nt或15954 nt,可翻译6种结构蛋白和2种非结构蛋白。PPRV呈世界性分布,目前在我国常有PPR疫情的报道。PPRV感染羊等小反刍动物后可造成高发病率和高死亡率,当前世界各国包括我国只能使用弱毒疫苗对该病进行免疫防控,免疫效果良好、保护期长,但稳定性差,安全性有待提高,同时还可能存在生物安全隐患;此外,随着PPRV感染宿主的不断增多,目前的疫苗无法针对野生动物进行免疫接种,导致疫情此起彼伏,不断扩大。利用反向遗传学技术构建重组PPRV病毒,不仅是研制更为安全、稳定、可区分感染与免疫新型疫苗的一种便捷途径,同时也是开展PPRV致病机制研究的工具,本研究重点以本实验室构建保存的PPRV Nigeria 75/1疫苗株的全长基因组cDNA质粒为原始材料,在此基础上开展PPRV弱毒疫苗株反向遗传系统的建立,并从微基因组水平、全长cDNA两方面开展病毒拯救工作:（1）设计并构建了PPRV的微型基因组质粒,与三个辅助质粒（分别表达PPRV N蛋白、P蛋白和L蛋白的真核表达质粒）共同转染细胞,拯救了PPRV微基因组,证明该病毒拯救系统有效,为拯救含全长基因组的重组PPRV奠定试验基础;（2）设计并构建了2种基于T7 RNA聚合酶系统的PPRV全长基因组cDNA质粒:一种只含PPRV全长基因组的cDNA序列;另一种在cDNA序列的P与M基因之间引入了表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的基因序列,研究结果为重组PPRV的拯救提供基础材料;（3）PPRV全长基因组cDNA质粒与辅助质粒共转染BSRT7/5细胞后,经IFA、Western blotting方法鉴定,所拯救的r PPRV与r PPRV-EGFP两种病毒的N、P、V、H蛋白均得到准确表达;盲传多代后,RT-PCR方法证明病毒拯救成功并能传代;RT-q PCR方法进一步分析了r PPRV与r PPRV-EGFP每次传代后病毒的复制情况。本研究利用建立的微基因组拯救系统验证了辅助质粒的功能性;在此基础上进一步构建了2种基于T7 RNA聚合酶系统的PPRV全长基因组cDNA质粒,与辅助质粒共同转染细胞拯救了两株重组病毒。这些研究结果在PPRV反向遗传系统的构建及新型疫苗开发方面具有一定的实用价值与理论参考,对于PPR的防控和消除具有重要意义。