论文部分内容阅读
目的 本实验通过气管内非暴露法复制大鼠实验性矽肺纤维化模型，研究在动物体内γ-干扰素（γ-Interferon，IFN-γ）对致纤维化因子白介素-4（Interleukin-4，IL-4）及转化生长因子-β1（Transforming growth factorβ1，TGF-β1）的拮抗作用机制及其对实验性矽肺纤维化预防性治疗的效果，为治疗肺纤维化提供实验依据。 方法 1．实验动物由中国医科大学实验动物部提供的清洁级健康雌性Wistar大鼠，随机分为生理盐水对照组、石英阳性组、γ-干扰素预防治疗组。采用非暴露式气管内注入法染尘。给大鼠注入二氧化硅（silicon dioxide，SiO2）粉尘悬液0.5ml，每只大鼠染尘总量为20mg。染尘次日起开始每天给予1×105IUγ-干扰素。 2．给予γ-干扰素治疗1个月、2个月后，每组宰杀7～9只动物。体重、肺湿重测定；肺组织羟脯氨酸（Hydroxyproline，HP）测定（氯胺T法）；病理形态学检查，HE染色、VG染色；免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（StreptAvidin-Biotin-enzyme Complex，SABC）法观察各组实验动物肺组织IL-4和TGF-β1蛋白表达情况，并采用图象分析系统对各组蛋白表达进行定量分析。 3．SPSS10.0软件对数据进行方差分析，差异有显著性后再作Q检验，P＜0.05具有显著性意义。 结果 1．大鼠肺脏器系数的变化：染尘后1个月、2个月石英组与盐水对照组比较肺脏器系数升高，差异有显著意义（P＜0.01）。染尘后1个月、2个月γ-干扰素治疗组与石英组比较肺脏器系数降低，与盐水对照组比较升高，但差异均无显著意义。 2.大翩市经脯氨酸含量的变化:染尘后1个月、2个月时，一干扰素治疗组肺经脯氨酸含量与石英组比较显著降低（P<0.05），与盐水对照组相比升高，其中1个月时升高具有显著意义（P<0.05）。 3.肺病理学检查:染尘后1个月、2个月治疗组大鼠的矽肺纤维化程度明显轻于石英组，病理分级较石英组减轻l/2一1级。 4.肺组织内IL一4和TGF一田表达:图象定量分析发现，染尘后1个月到2个月，石英组和IFN一丫治疗组IL一4阳性细胞积分光密度值有增高趋势，TGF一印阳性细胞积分光密度值有降低趋势。IFN一，治疗组大鼠肺中IL一4、TGF一pl阳性细胞积分光密度值均显著低于石英组（P<0.05或P<0 .01）。讨论 近几年来，在肺纤维化机制方面的研究取得了许多重要的进展，尤其是肺内的多种类型细胞以及细胞因子在这一复杂过程中所起的作用更引人注目，从而提出了I型与n型细胞因子的概念。 IFN一下是典型的I型细胞因子，主要由淋巴细胞和自然杀伤细胞分泌，有强大的免疫调节作用，被认为具有潜在的抗纤维化作用，其可能的机制包括:（l）拮抗n型细胞因子IL一4等的促纤维化活性;（2）拮抗TGF-田促胶原合成功能;（3）抑制纤维母细胞合成胶原。IL一4等n型细胞因子和TGF一田具有促进肺成纤维细胞增生并诱导肺成纤维细胞合成胶原蛋白的作用，TGF一田并可抑制胶原蛋白的降解。 本实验应用IFN一丫对矽肺大鼠进行1个月及2个月预防性治疗效果观察。结果发现1个月、2个月时IFN一，治疗组大鼠肺经脯氨酸含量均显著低于石英组，病理切片上显示出，治疗组大鼠肺纤维化程度明显轻于石英组。这表明IFN一，可降低矽肺纤维化的肺胶原蛋白含量，并对实验性矽肺纤维化具有一定的阻抑作用。免疫组化的结果显示，在这两个时点，IFN一，治疗组大鼠肺中IL一4、TGF一阻阳性细胞积分光密度值均显著低于石英组。提示IFN一丫对IL一4及TGF一田的表达也具有明显的抑制作用。综上所述，本实验提示IFN一，可能是通过拮抗IL一4、TGF一邵在肺中的表达来抑制肺纤维化发生发展。结论 1 .IFN一丫可降低矽肺纤维化大鼠肺胶原蛋白含量。 2.IFN一，可对实验性矽肺纤维化具有一定的阻抑作用。 3.IFN一，对矽肺大鼠肺中IL一4、TGF一田的蛋白表达具有明显的抑制作用，可能是通过拮抗IL一4、TGF一因在肺中的表达来抑制肺纤维化发生发展。